真菌由来天然物を用いた非アルコール性脂肪肝炎 (NASH) の新たな治療戦略の構築

使用真菌衍生的天然产物开发非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 的新治疗策略

• 批准号: 22K20897
• 负责人: 山口 智亮
• 金额: $ 1.5万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20897/
• 关键词: 非アルコール性脂肪肝炎; 内皮型一酸化窒素合成酵素; HepG2細胞; 線維化

非アルコール性脂肪肝炎 (NASH) はしばしば脂質異常症や糖尿病に合併する進行性の病態であり、肝硬変に移行した場合原則として根治治療は望めない。現在のところ肝硬変や肝細胞癌への進展抑制効果を示した治療薬はなく、NASH の進行を抑制する新規薬剤の開発が求められている。近年、NASH の発症にともない肝臓内の一酸化窒素（NO)による肝保護が消失し、結果として病態が難治化することが指摘されている。これまでの検討で真菌の培養上清から soluble epoxide hydrolase の phosphatase 活性化阻害作用を持つ化合物 #27 を見出した。phosphatase 活性阻害作用により 一酸化窒素合成酵素（eNOS）活性化が引き起こされることが報告されており、化合物 #27 が NASH の進行を抑制することが予想される。本研究では、化合物 #27 の NASH に対する効果を検討することを目的とした。令和 4 年度は、NASH に対する化合物 #27 の抗炎症効果について検討した。12 週齢において、NASH モデルマウスの炎症性サイトカインはピークアウトしており、通常のマウスと比較して有意な変化は認められず、#27 の抗炎症作用の評価には適さないことが判明した。8週齢において、炎症性サイトカインの変化を確認し、#27 の抗炎症作用の評価を実施中である。in vitro 実験では、ヒト肝癌由来細胞株 HepG2細胞に遊離脂肪酸を負荷し、24時間培養したものをNAFLD/NASH モデルとして使用した。MTTアッセイにて #27 の至適濃度を決定した。Oil Red O 染色にて、遊離脂肪酸負荷による細胞内脂質蓄積の有意な上昇を認めたが、#27 処理により上昇は抑制された。

非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 是一种进行性疾病，通常与血脂异常和糖尿病相关，原则上，如果疾病进展为肝硬化，则无法进行治愈性治疗。目前，尚无治疗药物显示出抑制肝硬化或肝细胞癌进展的作用，因此需要开发能够抑制NASH进展的新药。近年来，有人指出，随着NASH的发病，肝脏中一氧化氮（NO）的保肝作用消失，导致疾病变得更加难以治疗。在我们之前的研究中，我们发现化合物#27 可以抑制真菌培养物上清液中可溶性环氧化物水解酶的磷酸酶活化。据报道，磷酸酶活性抑制会导致一氧化氮合酶 (eNOS) 激活，化合物 #27 有望抑制 NASH 的进展。本研究的目的是研究化合物#27 对 NASH 的影响。在 2020 财年，我们研究了化合物 #27 对 NASH 的抗炎作用。 NASH模型小鼠在12周龄时炎症细胞因子达到峰值，与正常小鼠相比没有观察到明显变化，因此不适合评价#27的抗炎作用。在 8 周龄时，我们确认了炎症细胞因子的变化，目前正在评估 #27 的抗炎作用。在体外实验中，人肝癌来源的细胞系HepG2细胞负载游离脂肪酸并培养24小时，并用作NAFLD/NASH模型。通过MTT测定确定#27的最佳浓度。油红 O 染色显示，由于游离脂肪酸负载，细胞内脂质积累显着增加，但这种增加被 #27 处理抑制。