elucidation of enos regulation mechanism by a novel resistin-like molecule beta, and Its relationship to atherosclerosis

阐明新型抵抗素样分子β的enos调节机制及其与动脉粥样硬化的关系

基本信息

批准号：
22H03068
负责人：
東幸仁
金额：
$ 10.73万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2027-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

動脈硬化の発生・維持・進展の機序としてのRELMβ/eNOS/NO pathwayの解明のために、in vitro細胞実験として、以下の実験を実施した。ヒト臍帯静脈血管内皮細胞（HUVEC）およびマウス血管内皮由来細胞（EOMAC）を用いて、RELMβ投与による細胞内NO産生量はNO感受性蛍光色素DAF-2を用いて、細胞外NO濃度をGreiss法により測定。RELMβ投与によるHUVECおよびEOMACでのeNOSの発現およびリン酸化、eNOS制御に関連するAkt、AMPK、ERK1/2、p38、JNK、PKC、HSP90の発現ならびにリン酸化をWestern blot法を用いて検討。RELMβ投与によるHUVECおよびEOMACよりmRNAを抽出して、DNAアレイおよび RNA seq によるeNOS関連遺伝子をはじめとした網羅的遺伝子解析をバイオインフォマティクスを用いた遺伝子ネットワーク解析を用いて行った。同様の検討を、RELMβ欠損マウス（作製済）とRELMβ過剰発現マウス（作製済）より得られた血管内皮細胞において行なった。RELMβ投与によるHUVECならびにEOMACの細胞遊走能、増殖能や血管形成能を検討。また、in vivoマウス実験として、以下の実験を実施した。RELMβ欠損マウスに脂肪食を負荷する群とコントロール群において、血圧、心拍数、心機能、尿中NO代謝産物排泄量等の測定。RELMβ過剰発現マウスとコントロール群において、血圧、心拍数、心機能、尿中NO代謝産物排泄量等の測定した。ヒト血中RELMβ濃度測定用ELISAシステム作製した。RELMβヒトモノクロナル抗体作製から血ヒト血中RELMβ濃度測定用ELISAキットの作製までを独自に行い、血中RELMβ濃度測定系を新規に確立した。

为了阐明 RELMβ/eNOS/NO 通路作为动脉硬化发生、维持和进展的机制，我们进行了以下体外细胞实验。使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和小鼠血管内皮来源细胞（EOMAC），使用NO敏感荧光染料DAF-2测量由于RELMβ施用而产生的细胞内NO产生，并使用Greiss法测量细胞外NO浓度。测量。采用Western blot法检测RELMβ给药引起的HUVEC和EOMAC中eNOS的表达和磷酸化，以及与eNOS调节相关的Akt、AMPK、ERK1/2、p38、JNK、PKC和HSP90的表达和磷酸化。从用 RELMβ 处理的 HUVEC 和 EOMAC 中提取 mRNA，并使用生物信息学的基因网络分析，通过 DNA 阵列和 RNA seq 进行包括 eNOS 相关基因在内的综合遗传分析。对从 RELMβ 缺陷小鼠（制备）和 RELMβ 过表达小鼠（制备）获得的血管内皮细胞进行了类似的研究。通过 RELMβ 给药检查 HUVEC 和 EOMAC 的细胞迁移、增殖和血管生成能力。另外，以下实验作为小鼠体内实验进行。测量一组喂食脂肪饮食的RELMβ缺陷小鼠和对照组的血压、心率、心功能、尿NO代谢物排泄量等。测定RELMβ过表达小鼠和对照组的血压、心率、心功能、尿NO代谢物排泄量等。我们创建了一个 ELISA 系统来测量人类血液中的 RELMβ 浓度。我们自主研发了RELMβ人源单克隆抗体和测定人血液中RELMβ浓度的ELISA试剂盒，建立了新型血液RELMβ浓度测定系统。

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Effect of Novel Stratified Lipid Risk by “LDL-Window” and Flow-Mediated Dilation on the Prognosis of Coronary Artery Disease Using the FMD-J Study A Data

使用 FMD-J 研究 A 数据通过“LDL 窗口”和血流介导的扩张对冠状动脉疾病的预后进行新型分层脂质风险的影响

DOI：
10.1253/circj.cj-21-1068
发表时间：
2022
期刊：
Circulation Journal
影响因子：
3.3
作者：
Abe S;Haruyama Y;Kobashi G;Toyoda S;Inoue T;Tomiyama H;Ishizu T;Kohro T;Higashi Y;Takase B;Suzuki T;Ueda S;Yamazaki T;Furumoto T;Kario K;Koba S;Takemoto Y;Hano T;Sata M;Ishibashi Y;Node K;Maemura K;Ohya Y;Furukawa T;Ito H;Yamashin
通讯作者：
Yamashin

The prevalence of cardiovascular disease is higher in patients with bilateral low ankle-brachial index than in patients with unilateral low ankle-brachial index