固形腫瘍への抗腫瘍効果を劇的に向上させる新規因子を導入したiPS細胞由来T細胞の開発

开发融合新型因子的 iPS 细胞衍生 T 细胞，可显着提高针对实体瘤的抗肿瘤功效

基本信息

批准号：
22K20821
负责人：
石川晃大
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20821/
关键词：
iPS細胞再生T細胞遺伝子改変T細胞療法固形腫瘍腫瘍免疫

项目摘要

iPS-T細胞の遊走能・長期生存能・細胞傷害活性能をすべて向上・維持させる因子を抽出・発現させ、固形腫瘍に対する抗腫瘍効果の向上を検証するため、申請者が発見した有用遺伝子（国際誌投稿中）を発現したiPS-T細胞を作製し、皮下腫瘍モデルNSGマウスに静脈投与した。投与後14日目に腫瘍内に浸潤したヒトCD45、遺伝子導入の際に使用したレポーター遺伝子のmCherry両陽性細胞をフローサイトメトリー機を用いてソートし、腫瘍内浸潤iPS-T細胞を取得した。その際に有用遺伝子を発現させた末梢血由来CD8T細胞をコントロールに置き、その遺伝子発現をscRNA-seqを用いて解析した。その結果、有用遺伝子を発現したiPS-T細胞は複数のクラスターに分かれることが分かった。驚くべきことに、非有用遺伝子発現iPS-T細胞と比較して有用遺伝子発現iPS-T細胞は遺伝子発現が大きく異なり、そのクラスターが末梢血由来CD8T細胞と同様に十分に分かれる結果となった。次に有用遺伝子を発現したiPS-T細胞と非有用遺伝子発現iPS-T細胞、又は末梢血由来CD8T細胞と比較してどのような遺伝子発現変化が生じているか比較・評価を行った結果、T細胞にとって機能的な遺伝子が存在するクラスターで有用遺伝子を発現したiPS-T細胞は多く存在することが分かった。現在、そのクラスター内、又は、クラスター間で解析を行い、遺伝子の抽出に取り組んでいる最中である。

为了提取和表达提高和维持iPS-T细胞的迁移能力、长期存活能力和细胞毒活性的因子，并验证针对实体瘤的抗肿瘤效果的提高，申请人发现了有用的基因（我们生成了iPS-T 细胞表达“已提交给国际期刊”，并将其静脉注射给皮下肿瘤模型 NSG 小鼠。给药后第14天，使用流式细胞仪对浸润到肿瘤中的人CD45和mCherry（基因转移过程中使用的报告基因）均呈阳性的细胞进行分选，以获得浸润到肿瘤中的iPS-T细胞。此时，将表达有用基因的外周血来源的CD8T细胞用作对照，并使用scRNA-seq分析基因表达。结果表明，表达有用基因的 iPS-T 细胞分为多个簇。令人惊讶的是，表达有用基因的iPS-T细胞的基因表达与表达非有用基因的iPS-T细胞的基因表达显着不同，并且簇分离得很好，类似于外周血来源的CD8T细胞。接下来，我们比较并评估了表达有用基因的iPS-T细胞和表达无用基因的iPS-T细胞或外周血来源的CD8T细胞中发生了什么样的基因表达变化，结果发现存在许多iPS-T。在含有细胞功能基因的簇中表达有用基因的细胞。我们目前正在致力于分析簇内和簇间的基因并提取基因。