骨髄不全症における標的オトリ人工抗体開発に向けたネオエピトープ反応性T細胞の検出

检测新表位反应性 T 细胞以开发骨髓衰竭中的靶向人工抗体

基本信息

批准号：
22K15599
负责人：
野上彩子
金额：
$ 3万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

骨髄不全症は、T細胞集団のごく一部の変化が原因と思われるが、細胞集団を対象とした網羅的解析では原因分子の特定に至っていない。また、CAR-T療法後にも二次性の骨髄不全症が認められ、原因分子やその検査法は臨床的なアンメットニーズである。本年度は、CAR-T療法を施行後の血球減少から解析に着手した。同意を得た患者から経時的に採取した末梢血検体からPBMCおよび血清を採取当日に分離し解析に供した。解析に先立ち、試験系の陽性対象細胞としてCD19CAR陽性の株化細胞(CD19CAR-Jurkat細胞)を用いた。CD19CAR-Jurkat細胞は、当研究室で樹立された。各細胞分画の細胞表面および細胞内タンパクをCAR-T細胞とともに解析する目的で、CAR-T細胞の検出系を確立した。マルチカラーフローサイトメトリーではCD3/CD4/CD45RA/CD278(PD-1)/FMC63/CD196(CCR6)/CD127/CD25を同時検出し、Th1, Th2, Tm, Tn, Treg, Th17, PD-1陽性T細胞, CAR-T細胞を解析した。またCD8, CD196, KLRG1, CD56, IL-17, CD4を同時検出した。さらに、血清検体を用いてタンパクArrayを行い、ImageJ(NIH)を用いて画像解析した。2020年～2022年まで当院血液内科でCAR-T療法を施行された患者26名を対象とした後方視的解析では、1ヶ月または3ヶ月遷延する血球減少は、解析可能な者のうち各々85%および92.3%に認めた。遷延する血球減少の内訳はNeu減少61.5%、Hb減少84.6%、PLT減少53.8% であった。血球減少症例では末梢血中CAR-T細胞のexpansion以降にCD45RA-/CD196+細胞、CD159a+/CD56+細胞の比率および絶対数の上昇を認めた。

骨髓衰竭被认为是由一小部分 T 细胞群的变化引起的，但对细胞群的综合分析尚未确定致病分子。此外，即使在CAR-T治疗后仍观察到继发性骨髓衰竭，且致病分子和检测方法是临床未满足的需求。今年，我们开始分析 CAR-T 治疗后的细胞减灭术。在收集当天，从同意的患者随时间收集的外周血样本中分离出 PBMC 和血清，并进行分析。在分析之前，CD19CAR阳性细胞系（CD19CAR-Jurkat细胞）被用作测试系统中的阳性靶细胞。 CD19CAR-Jurkat细胞是在我们实验室建立的。我们建立了 CAR-T 细胞检测系统，以便与 CAR-T 细胞一起分析每个细胞组分的细胞表面和细胞内蛋白质。多色流式细胞术同时检测CD3/CD4/CD45RA/CD278(PD-1)/FMC63/CD196(CCR6)/CD127/CD25，Th1、Th2、Tm、Tn、Treg、Th17、PD-1 T细胞阳性并对CAR-T细胞进行了分析。此外，同时检测到CD8、CD196、KLRG1、CD56、IL-17和CD4。此外，使用血清样品进行蛋白质阵列，并使用ImageJ（NIH）进行图像分析。对2020年至2022年在我院血液科接受CAR-T治疗的26名患者进行回顾性分析，在可分析的患者中，持续1个月或3个月的血细胞减少症分别为85%和92.3%。长期血细胞减少的分解为Neu下降61.5%，Hb下降84.6%，PLT下降53.8%。在血细胞减少的情况下，扩增外周血 CAR-T 细胞后，观察到 CD45RA-/CD196+ 细胞和 CD159a+/CD56+ 细胞的比例和绝对数量增加。