単為発生胚を用いた成長期卵母細胞ゲノムにおける初期胚発生能獲得時期の同定

使用孤雌胚胎鉴定生长中的卵母细胞基因组中早期胚胎发育的时间

• 批准号: 22K20648
• 负责人: 山崎 渉
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20648/
• 关键词: 単為発生; ZGA; 卵子成長; 初期胚発生; 核移植; クロマチン構成; 卵母細胞

本年度はマウス非成長期卵母細胞(non-growing: ng)単為発生胚(ng/ng)の8細胞期での発生停止原因を解明することを目的とし、実験を行った。ng卵母細胞は1~2日齢の雌マウス卵巣から採取し、GV期卵母細胞および排卵卵子は成熟雌マウスから採取した。これら卵母細胞を用いて、GV期-MII期における連続核移植、続いて、塩化ストロンチウムおよびサイトカラシンBによる単為発生活性化により、ng/ng単為発生胚を作製した。初めにng/ng単為発生胚における初期胚発生能の詳細を観察した。その結果、活性化24時間後における2細胞期までの発生に問題はなかったが、48時間後以降に4細胞期を超えて発生した胚は約20%であり、そのほとんどが2細胞期で発生を停止した。そこで、ng/ng単為発生胚における胚性遺伝子活性(Zygotic Gene Activation: ZGA)を、1細胞期(Minor ZGA)および2細胞期(Major ZGA)にて、5-Ethynil Uridine (EU)を用いて検出し、染色後の相対蛍光強度を、成長が完了した卵母細胞単為発生胚(fully-grown: fg, fg/fg)と比較した。結果として、1細胞期(Minor ZGA)および2細胞期(Major ZGA)におけるEUの相対蛍光強度は、両者において有意な差は認められなかった。しかし、2細胞期におけるクロマチン構成を観察したところ、約40%のng/ng単為発生胚において核小体周囲へのクロマチンの凝縮の異常が観察された。これらの結果から、ng/ng単為発生胚の初期胚発生停止の要因として、2細胞期におけるクロマチンの凝縮不全が示唆された。

今年，我们进行了一项实验，目的是阐明在8细胞阶段在孤态发育胚胎（Ng/ng）中发育停滞的原因。从1-2天大的雌性小鼠的卵巢中收集NG卵母细胞，并从成熟的雌性小鼠中收集GV期卵母细胞和排卵卵母细胞。这些卵母细胞用于通过GV-MII阶段的串行核转移来产生Ng/ng孤pyenenoe胚，然后通过氯化腹膜和细胞切氏菌素进行孤theneneod激活。首先，我们观察到了NG/NG Parthenenogenod Embryos中早期胚胎发育势的细节。结果，在激活后24小时24小时内开发到两个细胞阶段没有问题，但是在48小时后，大约20％的胚胎在四细胞阶段以外发展，并且大多数胚胎在两个细胞阶段停止发展。因此，使用5-乙基尿苷（EU）在1细胞阶段（次要ZGA）和2细胞阶段（主要ZGA）（主要ZGA）和相对荧光强度在染色后，将胚胎植物强度与完全成长的卵形骨剂（FG）进行了比较，在1细胞阶段（次要ZGA）和2个阶段（主要ZGA）中，使用5-乙基尿苷（EU）在Ng/ng - dynennil尿苷（EU）中检测到胚胎基因活性（ZGA）与完全成长的卵形植物剂（FG（FG），FG是FG，FG，FG，FG，FG，FG与FG进行了比较。结果，在1细胞阶段（小ZGA）和2细胞阶段（主要ZGA）的欧盟的相对荧光强度中未观察到显着差异。然而，当在两个细胞阶段观察到染色质组成时，在大约40％的Ng/ng单肽胚胎胚胎中观察到围绕围核核糖周围的染色质的异常凝结。这些结果表明，在两个细胞阶段的染色质缩合失败是阻止Ng/ng孤态发育胚胎早期胚胎发育的一个因素。

项目成果

Vitrification of one-cell rat embryos in cryotubes by small-volume vitrification and rapid warming

通过小体积玻璃化和快速升温对冷冻管中的单细胞大鼠胚胎进行玻璃化冷冻

• 发表时间: 2022
• 作者: Seki S;Fukuda Y;Oikawa T;Higashiya M;Obata T;Yano M;Yamazaki W;Kawabe T
• 通讯作者: Kawabe T