ROCKシグナルを標的とした犬悪性黒色腫の新規治療法の探索

寻找针对ROCK信号的犬恶性黑色素瘤新治疗方法

基本信息

批准号：
21K20614
负责人：
高橋洋介
金额：
$ 2万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-08-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、申請者が同定した犬悪性黒色腫の新規治療標的である「PDPN-ROCKシグナル」の阻害による新たな全身療法の確立を目指した前臨床研究を行う。本年度は、PDPNをCRISPR/Cas9法にて欠損させた犬悪性黒色腫細胞株2株(ノックアウト株)および親株のmRNAシークエンスを実施し、PDPN-ROCKシグナルに起因する遺伝子発現変動を検証した。その結果、昨年度のin vitro assayにて明らかになった移動、浸潤、増殖に関連した遺伝子変動を認め、in vitro assayとの結果の一致を確認した。さらに、間葉-アメーバ転換に関連する遺伝子の発現変動を認めた。そこで、PDPN-ROCKシグナルと間葉-アメーバ転換の関連について、in vitro assayにて追加の評価を行なった。その結果、ノックアウト株では細胞形態の球体化指数の低下や細胞質突起の消失などを認め、アメーバ様の形態を示す親株に比べ間葉様の形態へと変化していた。つまり、PDPN-ROCKシグナルは犬悪性黒色腫において間葉-アメーバ転換を促進し、アメーバ様細胞による浸潤転移を促進していることが示唆された。また、ROCK阻害剤のin vitro添加によりノックアウト細胞株で観察された現象を再現できることもわかった。さらに、犬および人の粘膜由来悪性黒色腫症例検体のmRNAシークエンス公共データを用いて、PDPN-ROCKシグナルと間葉-アメーバ転換に関連した遺伝子群の発現変動を解析した。その結果、犬悪性黒色腫症例検体mRNAシークエンスデータにおいても、細胞株を用いた検証と同様に、PDPN-ROCKシグナルによる間葉-アメーバ転換の誘導を示唆するデータが得られた。これらの機序は人の粘膜型悪性黒色腫にも共通して見出された。

在本研究中，我们将进行临床前研究，旨在通过抑制“PDPN-ROCK信号”来建立新的全身疗法，这是申请人确定的犬恶性黑色素瘤的新治疗靶点。今年，我们利用CRISPR/Cas9方法对两种PDPN缺失的犬恶性黑色素瘤细胞系（敲除系）和亲本株进行了mRNA测序，以验证PDPN-ROCK信号引起的基因表达变化。结果，我们证实了去年体外试验中揭示的与迁移、侵袭和增殖相关的基因变化，并证实结果与体外试验一致。此外，我们观察到与间充质-阿米巴转变相关的基因表达的变化。因此，我们使用体外测定对 PDPN-ROCK 信号与间充质阿米巴转变之间的关系进行了额外评估。结果，敲除菌株表现出细胞形态球化指数降低和细胞质突起消失，与具有阿米巴形态的亲本菌株相比，形态变为类间充质形态。换句话说，PDPN-ROCK信号促进犬恶性黑色素瘤的间充质-阿米巴转变，促进阿米巴细胞的侵袭和转移。我们还发现，体外添加 ROCK 抑制剂可以重现在敲除细胞系中观察到的现象。此外，利用来自犬和人粘膜源性恶性黑色素瘤病例样本的公开mRNA序列数据，我们分析了与PDPN-ROCK信号和间充质-阿米巴转化相关的基因的表达变化。结果，与使用细胞系的验证类似，从犬恶性黑色素瘤病例样本mRNA序列数据中获得了表明PDPN-ROCK信号诱导间充质-阿米巴转变的数据。这些机制在人类粘膜恶性黑色素瘤中也很常见。

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Podoplanin promotes the tumor growth of canine malignant melanoma via Rho-associated kinase signals

Podoplanin 通过 Rho 相关激酶信号促进犬恶性黑色素瘤的肿瘤生长

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Masahiro Shinada;Daiki Kato;Namiko Ikeda;Toshio Li;Yuka Kodera;Masaya Tsuboi;James Chambers;Kazuyuki Uchida;Yukinari Kato;Ryohei Nishimura;Takayuki Nakagawa.
通讯作者：
Takayuki Nakagawa.

イヌ悪性黒色腫のPDPN-ROCKシグナルを標的とした新たな分子標的治療の検証

针对犬恶性黑色素瘤的 PDPN-ROCK 信号新分子靶向治疗的验证