Wnt5aによる歯根膜線維組織再生誘導を基盤とした改良型意図的再植法の開発

开发基于Wnt5a诱导牙周膜纤维组织再生的改良意向再植方法

基本信息

批准号：
15H06487
负责人：
長谷川大学
金额：
$ 0.92万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-08-28 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06487/
关键词：
歯根膜組織幹細胞石灰化抑制 Wnt5a Ror2 JNK

项目摘要

Wntファミリー分子の一つであるWnt5aとそのシグナルは、増殖や分化、遊走など様々な細胞機能に関与することが知られている。我々は最近、Wnt5a がヒト歯根膜幹細胞の骨芽細胞様分化（石灰化）を抑制することを明らかにし、歯根膜組織が石灰化することなく線維性結合組織を維持するメカニズムにWnt5aが関与している可能性を見出した。そこで我々は、この現象の詳細なメカニズムを明らかにすべく解析を行ってきた。まず、多分化能を持つ未分化なヒト不死化歯根膜細胞クローンHPDLSC_2-23をWnt5a含有石灰化誘導培地にて一定期間培養した結果、非含有群と比較してアリザリンレッドS陽性反応ならびに骨関連遺伝子群（ALP、BSP、およびOsterix）の発現が有意に低下し、また同時に、細胞内シグナル因子であるJNKのリン酸化が亢進することが分かった。次に、Wnt5aのレセプターの一つとして知られるRor2に着目し、siRNAによりRor2の発現をノックダウンしたHPDLSC_2-23をWnt5a含有石灰化誘導培地にて培養した結果、Wnt5aによって低下したアリザリンレッドS陽性反応ならびに骨関連遺伝子群の発現が有意に回復し、同時にJNKのリン酸化が低下した。さらに、JNKの阻害剤であるSP600125をWnt5aとともに添加した石灰化誘導培地にてHPDLSC_2-23を培養した結果、Wnt5aによって低下したアリザリンレッドS陽性反応ならびに骨関連遺伝子群の発現が有意に回復した。以上の結果より、Wnt5aはRor2-JNKシグナル伝達経路を介してヒト歯根膜幹細胞の石灰化を抑制することが明らかになった。我々は本研究で得られた知見により、Wnt5aとそのシグナルを活用した改良型意図的再植法など、歯の長期的な保存を目標とした新しい歯根膜組織再生治療法の開発に繋げていくことができるのではないかと期待している。

Wnt5a 是 Wnt 家族的成员，已知其信号参与多种细胞功能，如增殖、分化和迁移。我们最近发现，Wnt5a 抑制人牙周膜干细胞的成骨细胞样分化（矿化），这表明 Wnt5a 参与了牙周膜组织维持纤维结缔组织而不矿化的机制。因此，我们进行了分析，以阐明这一现象的详细机制。首先，我们将多能未分化人永生化牙周膜细胞克隆HPDLSC_2-23在含有Wnt5a的矿化诱导培养基中培养一定时间，结果发现茜素红S阳性反应与骨相关。一组基因（ALP、BSP和Osterix）的表达显着降低，同时细胞内信号因子JNK的磷酸化增加。接下来，我们关注被称为Wnt5a的受体之一的Ror2，并在含有Wnt5a的矿化诱导培养基中培养了Ror2的表达被敲低的HPDLSC_2-23的反应和表达。骨相关基因显着恢复，同时JNK磷酸化降低。此外，在补充有JNK抑制剂SP600125和Wnt5a的矿化诱导培养基中培养HPDLSC_2-23的结果是，茜素红S阳性反应和被Wnt5a降低的骨相关基因的表达显着降低。恢复了。上述结果表明Wnt5a通过Ror2-JNK信号通路抑制人牙周膜干细胞的矿化。我们将利用本研究中获得的知识开发新的牙周膜组织再生治疗方法，以长期保存牙齿为目标，例如利用 Wnt5a 及其信号的改进的有意再植方法，我希望这是可能的。