甲殻類におけるペプチドホルモン-受容体系の共進化と構造機能相関

甲壳类肽激素受体系统的协同进化和结构功能关系

基本信息

批准号：
15208011
负责人：
長沢寛道
金额：
$ 27.37万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

クルマエビの眼柄ペプチドホルモンのうち血糖上昇ホルモン族ペプチド(血糖上昇ホルモン(CHH)および脱皮抑制ホルモン(MIH))について以下の結果を得た。1.CHHのすべての分子が、MIHが有しているN末端から12番目のGlyを有していない。このGlyがCHH活性にとって不要なものか、あるいは逆に活性を低下させるのかを明らかにするために、CHHのうちのひとつCHH-IについてN末端から12番目のGlyを挿入した組み換え体を作製し、そのCHH活性を調べた。その結果、挿入したものは挿入しないものの約1/10の活性しか示さなかった。このことから、このGlyが入らないことが高活性を維持するのに重要であることがわかった。2.CHHの立体構造はこれまでMIHの立体構造に基づいてモデリングで推定されているだけであった。CHHの実際の立体構造を解析するために^<13>Cおよび^<15>NでダブルラベルしたCHH-Iの組み換え体を大腸菌で発現した。この分子は封入体に回収されたので、いったん還元したあとNi樹脂上でリフォールディング反応を行ったが、ラベルしないときは進んだ反応がラベルした分子では同じようには進行しないことがわかった。現在、この反応の収率を上げることを検討中である。3.MIHとMIH受容体の結合について、標的器官であるY器官の膜画分を用いてスキャッチャード解析を行った結果、解離定数Kd=4.76x10^<-10>M、最大受容体結合量Bmax=5.51x10^<-12>Mであると推定された。これらの値は、他の甲殻類で報告されている値とほぼ同程度であった。

在Kuruma虾中的眼缘肽激素中，血糖升高的激素肽（血糖升高的激素（CHH）和蜕皮抑制激素（MIH））如下获得。 1。所有CHH的分子都没有MIH具有的N端的12个Gly。为了确定这种Gly是否不需要CHH活性，还是相反，可以降低其活性，准备了一种重组，其中将n末端的第12个Gly插入了其中一个CHHS。检查了CHH-I的CHH活性。结果，尽管未插入插入的插入，但它们仅显示大约1/10的活动。这表明缺乏对于维持高活性很重要。 2。仅通过基于MIH的3D结构进行建模才能估算CHH结构。为了分析CHH的实际构象，用 ^<13> c和 ^<15> N的双标记的ChH-I的重组分在大肠杆菌中表达。在包含体中回收了该分子，一旦降低，在NI树脂上进行了重折叠反应，但是当未标记时，发现先进的反应与标记的分子没有以相同的方式进行。目前，我们正在考虑增加该反应的产量。 3.进行分析，使用靶器官器官的膜分数进行了MIH和MIH受体之间的结合，据估计，离解常数为KD = 4.76x10^<-10> m，最大受体结合量BMAX = 5.51x10^<-12> m。这些值与其他甲壳类动物中报道的值大致相似。