癌細胞選択的細胞致死活性を有する天然化合物に関する研究

具有癌细胞选择性细胞杀伤活性的天然化合物的研究

基本信息

批准号：
07672279
负责人：
井上誠
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究室で見出した天然化合物、没食子酸、ブリオノール酸、アクテオシドの癌細胞致死活性はアポトーシスにより引き起こされることが明らかになった。そこで、没食子酸に焦点を絞りその作用機序を検討した。没食子酸による細胞致死活性は、細胞内カルシウムキレーターのBAPTA-AM、過酸化水素分解酵素カタラーゼ、細胞内抗酸化剤N-アセチルシステインにより阻害されることより、細胞内Ca^<2+>濃度の上昇と活性酸素の産生が関与することが示唆された。また、細胞内の過酸化水素、脂質過酸化物の産生を2,7-dichlorofluorescein diacetateを用いて測定したところ、没食子酸添加の2分後には活性酵素の産生が観察された。この産生はN-アセチルシステインにより抑制されたが、カタラーゼ、BAPTA-AMでは抑制されず、これらの結果は没食子酸は、まず過酸化水素などの産生を誘導し、それに続き、細胞内カルシウムの上昇が惹起され細胞死へと導かれるものと考えられた。そこで、つぎに、癌治療への応用を考え、マウス肥満細胞腫P-815細胞の肝特異的転移に及ぼす作用を検討した。没食子酸はP-815細胞の静脈内移入の前、あるいは、後より50mg/kgの濃度でi.p.,i.v.投与することにより,肝臓での転移結節数、血清GOT,GPT値の減少、さらに、DBA2マウスで延命効果が観察された。これらの作用は没食子酸の肝障害抑制用、癌細胞接着抑制作用によるものではなく、転移が成立した肝臓での没食子酸による癌細胞選択的致死活性によることが示唆された。さらに、化学発癌モデルで、前癌病変が形成された後から、没食子酸をi.p.投与することにより、前癌病変結節数、病変面積の減少が観察された。これらの結果より、in vitroにおいて癌細胞にアポトーシスを誘導する没食子酸は、in vivoにおいても同様の活性を示し癌治療薬として可能性が示唆された。

研究表明，本实验室发现的天然化合物没食子酸、焦油酸和类叶升麻苷的杀伤癌细胞活性是由细胞凋亡引起的。因此，我们关注没食子酸并研究其作用机制。没食子酸的细胞杀伤活性受到细胞内钙螯合剂BAPTA-AM、过氧化氢降解酶过氧化氢酶和细胞内抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸的抑制，推测其增加与活性氧的产生有关。此外，当使用2，7-二氯荧光素二乙酸酯测量细胞内过氧化氢和脂质过氧化物的产生时，在添加没食子酸2分钟后观察到活性酶的产生。这种产生被N-乙酰半胱氨酸抑制，但不被过氧化氢酶或BAPTA-AM抑制。这些结果表明，没食子酸首先诱导过氧化氢等的产生，随后增加细胞内钙，这被认为是被诱导并导致的。细胞死亡。因此，接下来，我们考虑将其应用于癌症治疗，并研究小鼠肥大细胞瘤P-815细胞对肝脏特异性转移的影响。在静脉转移 P-815 细胞之前或之后以 50 mg/kg 的浓度进行腹腔注射和静脉注射时，没食子酸可减少肝脏中转移结节的数量、血清 GOT 和 GPT 值，并降低 DBA2 的存活率。在小鼠中观察到了效果。有人认为，这些作用并不是由于没食子酸抑制肝损伤或癌细胞粘附的能力，而是由于没食子酸对已发生转移的肝脏癌细胞的选择性杀伤活性。此外，在化学致癌模型中，通过在癌前病变形成后腹腔注射没食子酸，观察到癌前结节和病变面积的数量减少。这些结果表明，没食子酸在体外诱导癌细胞凋亡，在体内表现出类似的活性，并且具有作为癌症治疗剂的潜力。