葉用植物におけるフラボノイド類生産の区別的発現

叶面植物黄酮类化合物产生的差异表达

基本信息

批准号：
04671286
负责人：
野口博司
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671286/
关键词：
クズカルコン合成酵素イソフラボンゲノムDNA

项目摘要

クズ培養細胞系より得られたカルコン合成酵素cDNAを用い,ゲノムDNAライブラリーを検索しクローン解析を行ない,独立と思われる2種の遺伝子を得て,この上流域について検討した。この遺伝子2,3とbのうち500bpについてはシークェンスが完了している。これをこれまで知られている主なプロモーター領域と比較すると,インゲンのエリシターによって発現する主要なCHSのプロモーターとは上流-380から-840までで高い相同性が見い出された。中でも-145のTATAboxと推定される配列のすぐ上流にコンセンサス領域が存在し,まだインゲンのboxIIIに相当する領域は見い出された。一般には転写開始点から-400bpまでにプロモーター活性が存在すると考えられるが得られた全領域について,プロモーター解析用のベクターとして著名なpBI121に組み込み解析しようとしている。現在これをトリペアレンタルメイティング法により,アブロバクテリウムを介してタバコ,エンドウに戻してプロモーター機能の解析を行なおうとしている。これはブドウ,クズ等のプロトプラストを生成させ,エレクトッポレーション等による形質転換が,良い結果が得られない為,確実に形質転換体を得る目的で行なっている。又現在知られているプロモーターの中ではダイズのプロモーターとはほとんど相同性が検出されていない。また現在ダイズ由来の環元酵素cDNAを用い,クズのゲノムDNAにおける生合成遺伝子のクラスターを調べる上で,CHSと協同する環元酵素の遺伝子を検索し,この上流域を得るべく検討している。現在までの所,いまだアントシアン合成系にかかわると思われるCHSについては得られていない。

使用从野葛培养细胞系获得的查耳酮合酶cDNA，我们搜索基因组DNA文库并进行克隆分析以获得两个看似独立的基因，并研究了它们的上游区域。 2、3、b基因500bp测序已完成。与目前已知的主要启动子区域相比，发现上游-380至-840区域与芸豆诱导子表达的主要CHS启动子具有高度同源性。其中，在推定的TATAbox序列的-145处紧邻上游存在共有区域，并且仍然发现了与普通豆的boxIII相对应的区域。一般来说，启动子活性被认为存在于转录起始点至-400 bp之间，我们正试图分析将其整合到pBI121（一种著名的启动子分析载体）中获得的整个区域。目前我们正在尝试利用三亲交配的方法，通过土壤杆菌将该基因返回到烟草和豌豆植物中，并分析其启动子功能。这样做是为了产生葡萄、葛等的原生质体，并确保获得转化体，因为通过电穿孔等进行的转化不能产生良好的结果。此外，在目前已知的启动子中，几乎没有检测到与大豆启动子的同源性。此外，我们目前正在使用大豆来源的还原酶cDNA来研究葛基因组DNA中的生物合成基因簇，寻找与CHS配合的还原酶基因，并检查这些基因的上游区域。迄今为止，被认为参与花青素合成系统的CHS尚未获得。