薬用植物におけるフラボノイド類生産の基礎研究

药用植物黄酮类化合物生产的基础研究

基本信息

批准号：
03807139
负责人：
野口博司
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

クズ(Duer aria lobata)培養細胞を材料として、これにエリシタ-を処理しイソフラボン生合成系を活性化しCHS遺伝子を発現させcDNAを得て、これからゲノムDNAライブラリ-を検索レクロ-ン解析を行なった所独立と思わ激われる3種の遺伝子が得られ、中でキクロ-ン1,14と名付けた2種はいずれもエリシタ-で誘導される可能性が高い結果が得られた。現在までの所花弁の色素即ち5ヒドロキシ型カルコンから誘導されると考えられるアントシアン系色素生合成にかかわるカルコン合成酵素をコ-ドしていると考えられる遺伝子領域は得られていない。内生エリレタ-もしくはイ-スト抽出物を用いた際も、これまではイソフラボン生合成活性の上昇が見られると同時に細胞の死滅が生じないとされて来た所からプロトプラストの生成を試みたが、種々のセルラ-ゼ、マセロザイムを用い、また種々の細胞膜安定剤も生理的に健常なプロトプラストの生成に致らなかった。即ちプロトプラスト化によって遺伝子の読み出しが、即ちエリシタ-様作用が、生じるらしく、パセリにおけるカルコン合成遺伝子活性化解明にフットプリント法を用いたように都合の良い対照が得られないことが分った。またダイズ由来のレダクタ-ゼのシ-クエンスを調べ、これをPCR法によって得てクズのゲノムDNAにおける一連の生合成遺伝子のクラスタ-の可能性について検討中である。

以Duer aria lobata培养细胞为材料，用诱导子对其进行处理，激活异黄酮生物合成系统，表达CHS基因，并获得cDNA。由此，我们检索了基因组DNA文库并进行了克隆分析，发现了三个基因。获得了位点无关的旋风，其中两个旋风1和旋风14被发现很可能是由激发子诱导的。迄今为止，尚未发现被认为编码查耳酮合酶的基因区域，该酶参与花青素色素的生物合成，花青素色素被认为源自花瓣色素，即5-羟基查耳酮。我们尝试使用内源刺桐或酵母提取物产生原生质体，这些提取物已被证明可以增加异黄酮生物合成活性并且不会导致细胞死亡，各种纤维素酶、粗酶和各种细胞膜稳定剂未能产生生理上健康的原生质体。即，基因读出，即类似激发子的效应，似乎是通过原生质体形成而发生的，并且已发现不能获得方便的控制，如使用足迹法阐明查耳酮合成基因的激活的情况在欧芹中。我们还在检查通过 PCR 获得的源自大豆的还原酶序列，并研究在葛基因组 DNA 中聚集一系列生物合成基因的可能性。