副交感ニューロンにおけるF1CRhR/環状AMP信号の映像化

副交感神经元中 F1CRhR/环 AMP 信号的可视化

• 批准号: 14657480
• 负责人: 鈴木 隆
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657480/
• 关键词: 顎下神経節; 血管作動性小腸ペプチド; 下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド; 細胞内環状AMP濃度; 細胞内Ca2+濃度; L型カルシウムチャネル; VPAC1受容体; PAC1受容体

ハムスター顎下神経節細胞に下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド(PACAP)または血管作動性小腸ペプチド(VIP)を作用すると緩徐な膜コンダクタンスの減少と増加を伴う脱分極を発現する。同時に、PACAP, VIPは後ニューロン細胞体の高閾値活性化L型Ca2+チャネルを濃度依存性、電位非依存性に抑制(Endoh and Suzuki準備中)する。これは、Gタンパクのαサブユニットの関与を示唆し、PKA-mediated phosphorylationの関与を示唆する。受容体には、VPAC1またはVPAC2,PAC1の関与が示唆されている(Hayashi et al.,2002)。セカンドメッセンジャーの経路はGsを介するcAMP-kinase, Gq/11を介するIP3-Ca2+-CaM kinase, DAG-kinase Cの経路がある。わたしは、PACAPとVIP作用中のPKAへの活性化状態の変化と[Ca2+]iの変化を捉える。1.ハムスター顎下神経節から単一細胞を酵素処理を行い単離した。2.単一ニューロンをカバーグラスに貼り付けた。3.蛍光反応エネルギー変換法に基づくFlCRhR(蛍光色素を結合したkinase A)を細胞に注入した。4.fura-2を細胞内に注入して細胞内Ca2+濃度を測定した。5.FlCRhRの注入手技が十分でなく、細胞内cAMP濃度変化の解析ができていない。

当仓鼠颌下神经节细胞用垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）或血管活性肠肽（VIP）处理时，它们会发生去极化，并伴有膜电导的缓慢降低和增加。同时，PACAP和VIP以浓度依赖性和电压无关的方式抑制后神经元细胞体中高阈值激活的L型Ca2+通道（Endoh和Suzuki正在准备）。这表明 G 蛋白 α 亚基的参与，并表明 PKA 介导的磷酸化的参与。有人认为该受体涉及 VPAC1、VPAC2 和 PAC1（Hayashi 等，2002）。第二信使途径包括通过 Gs 的 cAMP 激酶、通过 Gq/11 的 IP3-Ca2+-CaM 激酶和 DAG 激酶 C。我检测到 PACAP 和 VIP 作用期间 PKA 激活状态的变化以及 [Ca2+]i 的变化。 1.通过酶处理从仓鼠颌下神经节中分离出单细胞。 2. 将单个神经元附着在盖玻片上。 3.基于荧光反应能量转换方法将FlCRhR（激酶A与荧光染料偶联）注入细胞内。 4.将Fura-2注射到细胞内，测定细胞内Ca2+浓度。 5.FlCRhR注射技术不充分，无法分析细胞内cAMP浓度的变化。

项目成果

Hayashi, Endoh, Shibukawa, Yamamoto, Suzuki: "VIP and PACAP inhibit L-, N-and P/Q-type Ca2+ channels of parasympathetic neurons in a voltage independent manner"Bull Tokyo Dental College. 43(1). 31-39 (2002)

Hayashi、Endoh、Shibukawa、Yamamoto、Suzuki：“VIP 和 PACAP 以电压独立的方式抑制副交感神经元的 L-、N-和 P/Q 型 Ca2 通道”Bull 东京牙科学院。