マウス胎児脳組織における神経前駆細胞の移動様式

小鼠胎儿脑组织中神经祖细胞的迁移模式

• 批准号: 14657002
• 负责人: 岡部 繁男
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657002/
• 关键词: トランスジェニックマウス; GFP; 嗅球; 蛍光顕微鏡法; 神経前駆細胞

マウス胎児脳組織における神経前駆細胞の移動を観察するため、神経前駆細胞に特異的に発現する遺伝子であるT α1 tubulinのpromoterを用いて、オワンクラゲ由来の蛍光蛋白質であるGFPを発現するトランスジェニックマウス系統を作成した。このマウスでは終脳から脊髄に至る神経前駆細胞において強いGFPの発現が胎生10日から15日の間に観察された。この胎児期のマウス嗅球を取り出し、ゲル内で器官培養し、数時間の間に起こる神経前駆細胞の嗅球内での移動をタイムラプス観察した。嗅球内での神経前駆細胞の移動は胎生13日および14日において活発であり、しかもその移動は極めて急速で、かつアメーバ様の運動様式を示した。このような運動はこれまで胎児期の脳組織において観察された事がなく、新しい神経前駆細胞の運動であると考えられる。移動中のGFP陽性細胞を固定し、神経細胞のマーカー分子であるMAP2で染色した所、移動中のGFP陽性細胞はMAP2陽性の神経前駆細胞である事が確認された。また、この神経前駆細胞の運動はアクチン重合阻害剤により抑制され、またカルシウムチャネルの阻害剤により抑制された事から、細胞内カルシウムによるアクチン依存性の細胞運動によっている事が示唆された。今回作成したT α1 tubulin promoterによってGFP分子を発現するトランスジェニックマウスは神経前駆細胞の胎児期脳内での移動様式を研究する上で極めて有用であり、また嗅球全体の器官培養をレーザー顕微鏡によるタイムラプス観察と組み合わせる事により、これまでの脳スライス標本では観察する事の出来なかった神経組織内での細胞移動様式を解析する事が可能になると考えられる。

为了观察小鼠胎儿脑组织中神经祖细胞的迁移，使用Tα1微管蛋白的启动子（一种在神经祖细胞中特异性表达的基因）创建了一种表达GFP的转基因小鼠系，一种源自水母的荧光蛋白。在这只小鼠中，在10至15天之间从端脑到脊髓的神经祖细胞中观察到强烈的GFP表达。去除该胎儿小鼠嗅球，在凝胶中培养器官，并进行延时观察，以迁移几个小时内发生的嗅球内的神经祖细胞。嗅球内的神经祖细胞的迁移在第13和14个胚胎时期活跃，其迁移非常迅速，并且表现出类似变形虫的运动。到目前为止，在胎儿脑组织中尚未观察到这种运动，被认为是新的神经祖细胞的运动。固定迁移的GFP阳性细胞并用MAP2（神经元标记分子）染色时，可以证实迁移的GFP阳性细胞是MAP2阳性神经祖细胞。此外，神经祖细胞的运动被肌动蛋白聚合抑制剂和钙通道抑制剂抑制，这表明由细胞内钙引起的肌动蛋白依赖性细胞运动。使用这次创建的Tα1微管蛋白启动子表达GFP分子的转基因小鼠在研究胎儿大脑中神经祖细胞的迁移率以及通过将整个嗅球的器官培养与激光显微镜进行了时间衰变观察的结合，这是可以分析的细胞迁移，这是可以观察到的脑部迁移，这是可以观察到的，这是可以观察到的脑部迁移，这是可以分析的，这是可以观察到的，这是可以分析的，从而可以观察到整个嗅球的观察，这是可以观察到的，这是可以分析的，这是可以观察到的，这是可以分析的，这是可以观察到的，这是可以分析的，这是可以观察到的。

项目成果

Ebihara, T., Kawabata, I., Usui, S., Sobue, K., S.Okabe: "Synchronized formation and remodeling of postsynaptic densities : long-term visualization of hippocampal neurons expressing postsynaptic density proteins tagged with GFP"Journal of Neuroscience. (i

Ebihara, T.、Kawabata, I.、Usui, S.、Sobue, K.、S.Okabe：“突触后密度的同步形成和重塑：表达 GFP 标记的突触后密度蛋白的海马神经元的长期可视化”杂志

Ebihara, T., Komiya, Y., Izumi-Nakaseko, H., Adachi-Akahane, S., Okabe, S., Okamura, Y.: "Coexpression of a Cav1.2 protein lacking N-terminus and the first domain specifically suppresses L-type calcium channel activity"FEBS Letters. 529. 203-207 (2002)

Ebihara, T.、Komiya, Y.、Izumi-Nakaseko, H.、Adachi-Akahane, S.、Okabe, S.、Okamura, Y.：“缺少 N 末端和第一个结构域的 Cav1.2 蛋白的共表达

Okabe, S.: "Birth, growth, and elimination of a single synapse"Anatomical Science International. 77. 203-210 (2002)

Okabe, S.：“单个突触的诞生、生长和消除”国际解剖科学。

Enomoto, M., Shinomiya, K., S.Okabe: "Migration and differentiation of neural progenitor cells from two different regions of embryonic central nervous system after transplantation into the intact spinal cord"Europian journal of Neuroscience. (in press).

Enomoto, M.、Shinomiya, K.、S.Okabe：“移植到完整脊髓后胚胎中枢神经系统两个不同区域的神经祖细胞的迁移和分化”欧洲神经科学杂志。

Nakatomi, H., Kuriu, T., Okabe, S., Yamamoto, S., Hatano, O., Kawahara, N., Tamura, A., Kirino, T., M.Nakafuku: "Regeneration of hippocampal pyramidal neurons by recruitment of endogenous neural progenitors : An animal model for a neuronal replacement the

Nakatomi, H.、Kuriu, T.、Okabe, S.、Yamamoto, S.、Hatano, O.、Kawahara, N.、Tamura, A.、Kirino, T.、M.Nakafuku：“海马锥体神经元的再生