脳ミオシンアイソフォームを指標とする脳損傷の診断法の開発

以脑肌球蛋白异构体为指标开发脑损伤诊断方法

基本信息

批准号：
05670397
负责人：
木村章彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670397/
关键词：
脳ミオシン脳損傷サンドイッチ ELISA

项目摘要

脳ミオシンアイソフォームを指標とする脳損傷の診断法を開発する目的で、脳ミオシンアイソフォームのサンドッチELISAによる高感度検出法について検討した。固相抗体、検出抗体の選定、反応条件の設定等を行い、極めて高感度な検出法を確立することができた。本法は、吸光度法で2.5-500ng,蛍光法では10pg-10ngの範囲で定量が可能であり、十分に実用に供しうる方法と考えている。本法により、脳損傷受傷ラットにおける血清中の脳ミオシンアイソフォーム量増加が確認されたが、損傷の程度と脳ミオシンアイソフォーム量との相関は、損傷程度のコントロールが困難で現在のところ明確ではない。脳組織の特定に本法を用いると、新鮮組織での0.1mg以下の微量組織量で特定可能であり、2週間経過した乾燥組織においてもほぼ同程度の量でも特定可能であった。従って、組織化学的に特定不可能な微量組織からも本法により脳組織の特定が可能となった。種々の原因で死亡した死体血中の脳ミオシンアイソフォーム量を本法により測定すると、死後24時間以内の死体血では、明らかに脳損傷による死亡例で脳ミオシンアイソフォーム量が増加していたが、死後24時間以上経過したものでは、死因に無関係に著しく脳ミオシンアイソフォーム量が増加した例が認められた。この死後長時間経過した死体血に見られる脳ミオシンアイソフォームの由来および、脳損傷に伴うものとの識別について現在検討中である。以上の結果は、第40回日本法医学会近畿地方会で報告され、今後の成果も加えて第78次日本法医学会総会において報告される予定である。

为了开发一种以脑肌球蛋白异构体为指标的脑损伤诊断方法，我们研究了一种使用夹心 ELISA 检测脑肌球蛋白异构体的高灵敏度检测方法。通过选择固相抗体和检测抗体，并设置反应条件，我们能够建立极其灵敏的检测方法。该方法可以利用吸光度法进行2.5～500ng的定量，利用荧光法进行10pg～10ng的定量，被认为是可以充分实用化的方法。利用该方法，证实了脑损伤大鼠血清中脑肌球蛋白亚型的含量增加，但由于难以控制程度，因此目前尚不清楚损伤程度与脑肌球蛋白亚型含量之间的相关性的伤害没有。用该方法鉴定脑组织时，可以鉴定新鲜组织中微量小于0.1mg的脑组织，也可以鉴定2周后干燥组织中类似量的脑组织。因此，该方法甚至可以从组织化学上无法识别的微量组织中识别脑组织。用该方法测定各种原因死亡的尸体血液中脑肌球蛋白同工型的含量时发现，死后24小时内的尸体血液中，脑肌球蛋白同工型的含量在以下情况下明显增加：因脑损伤而死亡的情况下，死亡后经过24小时以上的情况下，无论死因如何，脑内肌球蛋白异构体的量都会显着增加。我们目前正在研究死后很久在尸体血液中发现的脑肌球蛋白亚型的起源，以及如何将它们与脑损伤相关的亚型区分开来。上述结果已在第40届日本法医学会近畿地方会议上报告，今后的结果也计划在第78届日本法医学会总会上报告。