体内時計に基づく死亡時刻推定法の確立ー分子生物学的手法で死者の体内時計を読むー

建立基于生物钟推算死亡时间的方法 - 利用分子生物学方法读取死者的生物钟 -

基本信息

批准号：
19659173
负责人：
木村章彦
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659173/
关键词：
死亡時刻推定法体内時計時計遺伝子 RT-PCR サーカディアンリズム mPer2 mBmal1 mPer1

项目摘要

平成19年度のマウスを用いた体内時計に基づく死亡時刻推定法に関する基礎的研究において、死体臓器から抽出したRNAを試料として正確に体内時計を読むことが出来ることを示した。平成20年度は、教室での剖検例に本法を適用し、遺体の腎から抽出したRNAを試料として体内時計を読むことが可能かどうか検討した。死亡時刻が明らかで、死後2日以内の遺体からの腎を試料として、2つの時計遺伝子、Per2とBmal1の発現比(Per2/Bmal1)に基づく方法により正確に体内時計を読むことが可能であった。また、剖検例の心臓血あるいは末梢血を試料としても同様の方法で体内時計を読むことが可能であり、腎の体内時計とは位相がずれていることから、腎と血液の両方を試料とすることでより正確な死亡時刻の推定が可能と思われた。剖検例の死因、性別および年齢の体内時計に及ぼす影響について検討を行ったが、これらの要因はいずれも検出される体内時計に大きな影響を及ぼさないことが示された。さらに、本年はreal-time PCRを用いた検討も行い、通常のPCR、アガロースゲル電気泳動およびデンシトメトリーを組み合わせた方法と比較を行った。real-time PCRによる方法は、通常のPCRによる方法に比較してより時計遺伝子の振動の振幅を大きく検出することが可能であり、且つより短時間で測定が終了することが明らかとなった。以上のことから、「分子生物学的手法で死者の体内時計を読む」という本研究の所期の目的はほぼ達成されたと考える。今後は研究結果を論文発表するとともに実用に向けたデータの蓄積に努める予定である。

2007年，基于小鼠生物钟估算死亡时间的方法的基础研究表明，利用从尸体器官中提取的RNA可以准确读取生物钟。 2008年，我们将这种方法应用于课堂尸检案例，并研究是否可以利用从尸体肾脏中提取的RNA来读取生物钟。利用死亡2天内尸体的肾脏样本，采用基于两个时钟基因Per2和Bmal1表达比（Per2/Bmal1）的方法，可以准确读取生物钟，死亡时间为知道。另外，以尸检的心脏血或末梢血为样本，可以以同样的方式读取生物钟，并且由于相位与肾脏生物钟不同相，因此可以同时使用肾脏生物钟。这样做似乎可以更准确地估计死亡时间。我们研究了尸检病例中死因、性别和年龄对生物钟的影响，但结果表明这些因素对检测到的生物钟没有显着影响。此外，今年我们还研究了实时PCR的使用，并将其与传统PCR、琼脂糖凝胶电泳和光密度测定相结合的方法进行了比较。已经清楚的是，实时PCR方法比传统PCR方法可以检测更大幅度的时钟基因振荡，并且可以在更短的时间内完成测量。综上所述，我们认为这项研究的最初目的“利用分子生物学方法读取死者的生物钟”已经基本实现。未来，我们计划以论文形式发表研究成果，努力积累实用数据。