界面活性剤ミセル-ポリマー混合水溶液の相分離を用いる膜タンパク質の抽出・分離

利用表面活性剂胶束-聚合物混合水溶液的相分离提取和分离膜蛋白

基本信息

批准号：
05650757
负责人：
齋藤徹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05650757/
关键词：
界面活性剤ミセル水溶性ポリマー相分離膜タンパク質抽出

项目摘要

種々のアルキルグルコシド系界面活性剤ミセル水溶液が水溶性ポリマーの添加によって界面活性剤を多く含む界面活性剤相と水溶性ポリマーを含む水相とに相分離した。界面活性剤としてはオクチクグルコシド、オクチルチオグルコシドおよびノニルググコシドが相分離系に最も適しており、また、水溶性ポリマーとしてはポリエチレングリコールやデキストランが相分離を引き起こすうえで最も有効であった。この相分離現象はポリマーの分子量や濃度が増大するにつれ、より促進された。また、タンパク質の安定化剤として用いられるグリセロールや塩なども相分離に大きく影響した。これらの相分離現象はタンパク質の変性を抑えながら取り扱うことのできる0℃で引き起こされた。そこで、界面活性剤によって可溶化されたタンパク質を本相分離系を用いて抽出分離し、精製することの可能性を明らかにするために、相分離系における種々のタンパク質の抽出挙動を調べた。その結果、バクテリオロドプシンやチトクロムb_5などの疎水性膜タンパク質は界面活性剤相に抽出されたのに対し、ペルオキシダーゼやチトクロムcなどの親水性タンパク質は水相に残存した。また、0℃における相分離後の界面活性剤相中におけるバクテリオロドプシンの安定性は、従来から検討されているトリトンX-114非イオン界面活性剤水溶液の加熱によって引き起こされる相分離系を用いたときの界面活性剤相中におけるバクテリオロドプシンの安定性よりも大きかった。以上のことから、本相分離系は膜タンパク質のための新しい抽出分離法として有用であると考えられる。

各种烷基葡糖苷表面活性剂的水性胶束溶液在添加水溶性聚合物后相分离成富含表面活性剂的表面活性剂相和含有水溶性聚合物的水相。作为表面活性剂，辛基葡糖苷、辛基硫代葡糖苷和壬基葡糖苷最适合相分离体系，而作为水溶性聚合物，聚乙二醇和葡聚糖最能有效地引起相分离。随着聚合物分子量和浓度的增加，这种相分离现象进一步促进。此外，用作蛋白质稳定剂的甘油和盐对相分离有显着影响。这些相分离现象发生在 0°C，这使得可以在抑制变性的同时处理蛋白质。因此，为了阐明使用该相分离系统提取和分离纯化表面活性剂溶解的蛋白质的可能性，我们研究了相分离系统中各种蛋白质的萃取行为。结果，疏水性膜蛋白（如细菌视紫红质和细胞色素b_5）被提取到表面活性剂相中，而亲水性蛋白（如过氧化物酶和细胞色素c）保留在水相中。此外，使用Triton X-114非离子表面活性剂水溶液加热引起的相分离系统，研究了0°C相分离后表面活性剂相中细菌视紫红质的稳定性，该稳定性高于之前研究的稳定性。表面活性剂相中的细菌视紫红质。基于上述，该相分离系统被认为可作为一种新的膜蛋白提取和分离方法。