6型蛋白分泌装置OMVを利用した0157コンポーネントワクチン開発に関する研究

利用6型蛋白分泌装置OMV开发0157组分疫苗的研究

基本信息

批准号：
18659123
负责人：
山本友子
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659123/
关键词：
感染症細菌ワクチン遺伝子 OMV O157 病原性

项目摘要

我々はOuter membrane vesicle(OMV)を6型分泌装置として位置づけ,細菌蛋白の宿主標的細胞へのデリバリーシステムとしての機能について研究を行ってきた。一方,我々は,腸管出血性大腸菌O157:H7の病原性発現に関する研究を展開してきているが,その中でClpXPが本菌の腸管付着に関連するIII型蛋白分泌システムの発現調節に関わることを見出した。昨年度の研究で,O157:H7のOMVの産生条件を検討し,AAA+ protease memberであるClpXPの欠損株が大量のOMVを産生することを明らかにした。そこで本年度は,OMVを利用したO157OMVコンポーネントワクチンの構築を目的として,OMVによるO157:H7の毒素のデリバリーの可能性について検討し以下の事柄を明らかにした。1.大腸菌O157:H7の毒素Stx1/2の特異抗体を用いて,Western blottingを行い,両毒素の分泌量を検討した結果,それらの分泌量はClpXP欠損によって,顕著に増加することが明らかとなった。2.OMVを大量に産生するClpXP変異株よりOMVを精製し,電子顕微鏡解析,生化学的解析を行った。その結果,精製したOMVfractionにはO157:H7の毒素Stx1/2が含まれることが明かとなった。さらにVero細胞に精製したOMVを接種したところ,細胞毒性が観察された。これらの結果は両毒素がOMVによって宿主細胞へ輸送される可能性を強く示唆している。無毒型のSTx1,Stx2を用いて,OMVのコンポーネントワクチン構築をさらに進める意義を見出すことができた。

我们将外膜囊泡 (OMV) 定位为 6 型分泌装置，并一直在研究其作为细菌蛋白向宿主靶细胞的递送系统的功能。另一方面，我们一直在对肠出血性大肠杆菌O157:H7的致病性进行研究，发现ClpXP参与调节与该细菌肠粘连相关的III型蛋白分泌系统的表达。它。在去年的研究中，我们调查了O157:H7 OMV的生产条件，发现缺乏AAA+蛋白酶成员ClpXP的菌株产生了大量的OMV。因此，今年，为了利用OMV构建O157 OMV成分疫苗，我们研究了OMV传递O157:H7毒素的可能性，并澄清了以下几点。 1.使用大肠杆菌O157:H7毒素Stx1/2的特异性抗体进行蛋白质印迹，检查两种毒素的分泌量，结果发现两种毒素的分泌量均显着增加。由 ClpXP 缺乏它变成了。 2.从产生大量OMV的ClpXP突变株中纯化OMV，并进行电镜和生化分析。结果显示纯化的OMV级分含有O157:H7毒素Stx1/2。此外，当用纯化的OMV接种Vero细胞时，观察到细胞毒性。这些结果强烈表明这两种毒素可能通过 OMV 转运至宿主细胞。我们发现使用无毒的 STx1 和 Stx2 进一步推进 OMV 成分疫苗的构建具有重要意义。