血液脳関門透過能をもつES細胞由来細胞株の樹立と脳内ターゲッティング機構

具有血脑屏障通透性和脑靶向机制的ES细胞来源细胞系的建立

基本信息

批准号：
18659023
负责人：
伊藤孝司
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1.Sandhoff病マウス由来株化ミクログリアの活性化機構及び脳内移行の解析Sandhoff病は、中枢神経障害を伴うリソソーム病の一種であり、β-Hexosaminidase(Hex)を構成するβ鎖遺伝子の変異が原因で、脳内のGM2ガングリオシド(GM2)の過剰蓄積を伴って発症する常染色体劣性遺伝病である。この疾患モデルマウス(SDマウス:Hexb-/-)の細胞治療およびex vivo遣伝子治療用のドナー細胞の開発を目的として、SDマウス脳由来の株化ミクログリアの性状と脳内移行能を解析した。1) 昨年度、SDミクログリアではGM2、GA2および末端GlcNAc含有オリゴ糖が細胞内に過剰蓄積し、Macrophage inflammatory factor-1(MIP-1α)の産生・分泌が充進していることを明らかにした。本年度は、この充進にPhospholipase C(PLC)、Protein kinase C(PKC)およびB(PKB or Akt)を介したシグナリングが関与し、MIP-1α遺伝子の転写およびタンパク質の分泌制御に異常があることを初めて明らかにした。2) マウスHexbと緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を含む組換えレンチウイルスを作製してSDミクログリアに遺伝子導入を行い、得られた恒常発現株を野生型マウスの尾静脈内に注入すると、一部が脳内に移行し、脳幹領域の実質内に侵入しており、脳移行性細胞としての機能を保持していることが明らかになった。2.マウス脳血管内皮細胞株由来ミクログリア誘引因子の解析血液脳関門を構成する脳血管内皮細胞と脳内移行能をもつミクログリアとの相互作用を解明する目的で、マウス脳血管内皮細胞株の培養上清中のマウスミクログリア誘引因子について解析した。1) マウス脳血管内皮細胞株(MBEC4)の培養上清中には、単球には作用しないが、ミクログリアの浸潤や遊走能を促進し、トリプシン感受性を示す液性因子が存在することを明らかにした。培養上清を株化ミクログリアに作用させたところ、CDllbの発現とアクチン重合が増大し、ミクログリアの活性化と運動能の充進が誘導された。2) MBEC4由来培養上清をゲルろ過により分離したところ、500kDa以上の高分子領域と5kDa付近の低分子領域にミクログリア誘引活性が検出され、培養上清では高分子タンパク複合体として存在する可能性が示唆された。3) 一方、血液脳関門を構成するアストロサイト由来の培養上清をMBEC4由来培養上清に混合すると、ミクログリア誘引活性は用量依存的に阻害され、アストロサイト由来のミクログリア誘引阻害因子の存在も示唆された。これらの結果から、脳血管内皮細胞がミクログリアの脳内移行性を促進する液性タンパク因子を分泌しており、一方、アストロサイトは血液脳関門を強化し、ミクログリアの侵入を阻害する因子を分泌していると考えられる。現在、尾繊維芽細胞由来核移植ntES細胞からの血管内皮細胞およびミクログリアの分化誘導を試みている。

1。分析从桑德霍夫疾病桑霍夫疾病衍生的小胶质细胞菌株的激活机制和大脑转移分析是一种与中枢神经系统疾病相关的溶酶体疾病，并且是一种构成Beta链基因突变的大脑（GM2）的过度积累的常染色体遗传遗传疾病，该遗传疾病会出现过多的GM2 Gangliosides（GM2）。为了开发用于细胞疗法的供体细胞和体内诱导的该疾病模型小鼠（SD小鼠：HEXB - / - ）的敏化，并用于开发供体细胞进行过体敏化治疗，我们分析了从SD小鼠的大脑及其迁移到大脑中的小胶质细胞菌株的特性。 1）去年，据透露，GM2，GA2和末端含GlcNAC的含寡糖在SD小胶质细胞中积累的寡糖，从而导致巨噬细胞炎性因子1（MIP-1α）的产生和分泌。今年，我们首次透露，通过磷脂酶C（PLC），蛋白激酶C（PKC）和B（PKB或AKT）信号传导参与了这一过程，并且MIP-1α基因和蛋白质分泌法规的转录异常。 2）当产生含有小鼠HexB的重组慢病毒和绿色荧光蛋白（GFP）基因，并将基因转移到SD小胶质细胞中，并将所得的本状表达菌株注入野生型小鼠的尾静脉中，部分地迁移到大脑中，迁移到了脑脑脑中的脑形脑形区域，并迁移了脑系统的区域。 2。分析小鼠脑血管内皮细胞系的小胶卷吸引因子，以阐明构成血脑屏障和小胶质细胞的脑血管内皮细胞之间的相互作用，这些细胞具有转移到大脑中的血脑屏障和小胶质细胞，我们分析了小鼠小鼠小鼠在培养基上吸引小鼠小鼠小鼠脑脑脑脑内膜细胞的小鼠小鼠的吸引因子。 1）据透露，在不作用于单核细胞的小鼠脑血管内皮细胞系（MBEC4）的培养物中存在一个体液因素，而是促进小胶质细胞的侵袭和迁移，并表现出胰蛋白酶敏感性。当在小胶质细胞菌株上实现培养上清液时，CDLLB表达和肌动蛋白聚合增加，并诱导小胶质细胞激活和运动性增强。 2）当通过凝胶过滤分离MBEC4衍生的培养上清液时，在500 kDa或更高的聚合物区域中检测到小胶质细胞诱导活性，而小区域则在5 kDa左右，这表明它可能在培养物中作为聚合物蛋白复合物存在。 3）另一方面，当构成血脑屏障的星形胶质细胞的培养上清液与源自MBEC4的培养上清液混合时，以剂量依赖性的方式抑制了小胶质细胞吸引活性的培养物，这表明是依赖性的，这表明存在微层压素的抑制剂，从而吸引了抑制抑制剂来自星形粒细胞。这些结果表明，脑血管内皮细胞分泌促进小胶质细胞脑迁移的体液蛋白因子，而星形胶质细胞分泌增强血脑屏障并抑制小胶质细胞进入的因素。目前，我们正在尝试诱导来自尾纤维细胞的TES细胞的血管内皮细胞和小胶质细胞的分化。