プロテオームを基盤とする膠原病関連新規自己抗体の同定・解析法の確立

基于蛋白质组的新型胶原病相关自身抗体鉴定分析方法的建立

• 批准号: 18651097
• 负责人: 小森 浩章
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18651097/
• 关键词: 無細胞蛋白質合成系; AlphaScreen法; 自己抗体; 自己免疫疾患; 疾患モデル動物; 組み換え近交系; 膠原病; 無細胞タンパク質合成系; 疾患モデル; MRL; lprマウス; 組換え近交系; genomics

目的:無細胞タンパク質合成系とAlphaScreen法、ならびに膠原病関連組換え近交系MXH/lprマウスを組合わせ、膠原病の病因・病態解析や病状の把握に有用な新規自己抗体をhigh-throughputに検出、同定する手法の確立を試みた。方法:これまでにMRL/lprマウスとC3H/lprマウス(組換え近交系MXH/lprの親系統)の交配系を用いて同定された膠原病関連疾患感受性遺伝子座から位置的候補遺伝子を120個選び、無細胞タンパク質合成系によりビオチン融合蛋白質を合成した。これらの合成蛋白質に対する血清中自己抗体の有無を、組換え近交系MXH/lprマウスと両親系統の計15系統を対象に、AlphaScreen法を用いて解析した。検出された自己抗体価と血管炎病態の組織学的スコアとの関連を統計学的に解析した。結果:解析の結果、血管炎病態と統計学的に有意な相関(P<0.05)を示す17個の新規自己抗体が認められた。検出された自己抗体は月齢により異なるものであった。今後は無細胞合成蛋白質系を用いたELISA systemの樹立によりAlphaScreen法による解析結果を定量的に検証する実験系の確立を目指す。結論:本systemはhigh throughputな新規自己抗体検出に非常に有用である。

目的：我们试图建立一种检测和识别高通量中新型自身抗体的方法，这对于分析胶原蛋白疾病的发病机理和病理非常有用并了解胶原蛋白疾病的病理。方法：从与MRL/LPR小鼠和C3H/LPR小鼠的配合系统（重组染料组MXH/LPR的亲本菌株）和生物素融合蛋白合成的MRL/LPR小鼠和C3H/LPR小鼠（亲生蛋白融合蛋白的父母菌株）中，选择了120个位置候选基因。使用Alphascreen方法分析了15种菌株，包括重组近近交近杂交MXH/LPR小鼠和父菌株，分析了针对这些合成蛋白的血清自身抗体的存在或不存在。统计分析了检测到的自身抗体滴度和血管炎病理学的组织学评分之间的关​​联。结果：分析揭示了17种新型自身抗体，具有统计学意义的相关性（P <0.05）与血管炎病理学。检测到的自身抗体因月的年龄而有所不同。将来，我们旨在建立一个实验系统，该系统通过使用无细胞合成蛋白系统建立ELISA系统来定量地验证分析结果。结论：该系统对于检测高吞吐量的新型自身抗体非常有用。

项目成果

Cappuccino mutation in an autoimmune-prone strain of mice suggests a role of platelet function in the progression of immune complex crescentic glomerulonephritis.

• DOI: 10.1002/art.22059
• 发表时间: 2006-09
• 期刊: Arthritis and rheumatism
• 作者: Minako Yoshida;K. Saiga;T. Hato;Shoko Iwaki;T. Niiya;N. Arita;H. Komori;T. Tsubaki;H. Furukawa;M. Terada;K. Maeyama;K. Nemoto;M. Nose;M. Ono