トランスジェニック動物を用いたインビボ神経細胞同定法の開発

利用转基因动物开发体内神经元识别方法

基本信息

批准号：
18650081
负责人：
桜井武
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

軟体動物のFMRFamideの受容体をトランスジーンを用いてオレキシン産生神経に特異的に発現させたマウスを開発した。この受容体はリガンドの結合により陽イオンチャネルが開口する性質をもっている。このマウスをもちいると、マルチバレルの電極を用いて、電気泳動的にFMRFamideを投与することにより、活性化するニューロン、つまりオレキシン産生ニューロンを同定し、そのニューロンから細胞外記録をすることができる。このマウスを用いて、脳波・筋電図同時測定をしながら、オレキシンニューロンの細胞外記録を行い、睡眠・覚醒相の変化と格相におけるオレキシンニューロンの活動を記録することにより、オレキシンニューロンの活動と睡眠・覚醒相との関連を明らかにすることが可能になると考えられる。今年度は、トランスジェニックマウスの開発を行い、いくつかのファウンダーを得たが、残念ながら、タンパク質レベルで機能的なFMRFamide受容体を発現するラインが得られなかった。そこで、レンチウィルスを用いて、後天的にFMRFamide受容体を発現させる方法に切り替えた。FMRFamide受容体のコーディング領域の前にloxPサイトをはさんだEGFPを組み込んだコンストラクトを作成し、Cre recombinase存在下でのみFMRFamide受容体が発現するようにした。一方、オレキシン産生神経に特異的にCre recomibnaseを発現するマウスを確立し、このマウスに前述のコンストラクトをウィルスベクターを用いて発現させることにより、オレキシン産生神経特異的にFMRFamide受容体を発現させることに成功した。

开发了小鼠，其中软体动物FMRFAMIDE的受体使用转基因在产生的神经中特异性表达。该受体具有通过配体结合打开阳离子通道的特性。使用该小鼠，可以通过多桶电极，活化的神经元，IE，甲状腺素产生神经元进行电泳施用FMRFAMIDE，并可以通过神经元进行细胞外记录。使用此小鼠，在同时测量脑电图和肌电图的同时，进行了Orexin神经元的细胞外记录，并记录睡眠/唤醒阶段的变化以及在固有阶段中Orexin神经元的活性，人们认为可以澄清Orexin神经元活动和睡眠/唤醒阶段之间的关系。今年，我们开发了转基因小鼠并获得了几个创始人，但不幸的是，我们无法获得在蛋白质水平上表达功能性FMRFAMIDE受体的线。因此，我们切换到一种使用慢病毒获得FMRFAMIDE受体的方法。创建了一个结合EGFP的构造，在FMRFAMIDE受体的编码区域之前与LOXP位点相交，因此仅在CRE重物组合酶的情况下表达FMRFAMIDE受体。另一方面，建立了产生Orexin的神经中特异性表达Cre Comiminbnase的小鼠，并通过使用病毒载体在小鼠上表达上述构建体，FMRFAMIDE受体在产生的Nerve中被特异性表达。

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Cholinergic Regulation of Orexin/Hypocretin Neurons through M3 Muscarinic Receptor in mice

通过 M3 毒蕈碱受体对小鼠食欲素/下丘脑分泌素神经元的胆碱能调节

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J.Pharmacol.Sci. 106
影响因子：
0
作者：
Ohno;K.;Hondo;M.;Sakurai;T.
通讯作者：
T.

GABAB receptor in orexin neurons is highly important for proper regulation of wakefulness.

食欲素神经元中的 GABAB 受体对于正确调节觉醒非常重要。

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
Sakurai;T.
通讯作者：
T.

Orexin neurons are directly and indirectly regulated by catecholamines in a complex manner.

食欲素神经元以复杂的方式受到儿茶酚胺的直接和间接调节。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
J Neurophysiol 96(1):
影响因子：
0
作者：
Yamanaka A;Sakurai T.他
通讯作者：
Sakurai T.他

Narcolepsy and Hypersomnia

发作性睡病和嗜睡症

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Sakurai;T;Sakurai T.
通讯作者：
Sakurai T.

Uexmedetomidine inhibits muscarinic type 3 receptors expressed in Xenopus oocytes and muscarine-induced intracellular Ca(2+)

Uexmedetomidine 抑制非洲爪蟾卵母细胞中表达的毒蕈碱 3 型受体和毒蕈碱诱导的细胞内 Ca(2 )

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 375
影响因子：
0
作者：
Takizuka A;Minami K;Uezono Y;Horishita T;Yokoyama T;Shiraishi M;Sakurai T;Shigematsu A;Ueta Y.
通讯作者：
Ueta Y.