Rhoキナーゼの新しい展開

Rho激酶的新进展

基本信息

批准号：
17659382
负责人：
古森公浩
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659382/
关键词：
Rho-kinase eNOS 内膜肥厚

项目摘要

(背景と目的)Rho/Rho-kinase pathwayは血管平滑筋細胞でのミオシン軽鎖の直接リン酸化とミオシン脱リン酸化酵素の不活性化を介して血管収縮を起こし、心血管系生理機能の調節に重要な役割を果たしていることが、近年の研究により明らかにされてきた。一方、内皮細胞のeNOSはNOを合成し血管平滑筋を弛緩させる。両者のcross-talkについて、eNOS活性制御に重要な二つのリン酸化サイト(Thr495とSer1177)のうち、今までRho-kinaseの影響が明らかにされていないThr495に注目して我々は研究を行った。(結果)in vitroの系では、活性型Rho-kinaseによりThr495がリン酸化されることを確認した。in vivoでも活性化型Rhoあるいは活性化型Rho-kinaseを発現させたCOS-7細胞の系にてThr495のリン酸化レベルの上昇を確認した。また、培養血管内皮細胞をトロンビンで刺激した際のThr495のリン酸化レベルの経時的変化がRho-kinaseの活性レベルの推移と一致することを明らかにした。in vivoの実験では、細胞をRho-kinase阻害剤で処理することにより、Thr495のリン酸化レベルが著明に抑制されることも確認した。(考察とまとめ)以上の実験結果から、Rho-kinaseがeNOSのThr495を直接リン酸化することが示された。eNOSはThr495のリン酸化により不活性化するため、我々の結果から、Rho-kinaseによりThr495が直接リン酸化を受けることでeNOS活性は抑制されると考えられる。我々の研究結果は、既に報告されているRho-kinase阻害剤の心血管系に対する治療効果の機序として、eNOS活性化・NO産生増強による血管内皮機能改善作用の関与を示唆する知見である。

（背景和客观）最近的研究表明，Rho/Rho-激酶途径通过直接磷酸化肌球蛋白光链在血管平滑肌细胞中引起血管收缩，并使肌球蛋白去磷酸化失活，并在调节心血管物理学中起重要作用。另一方面，内皮细胞中的eNOS合成了NO并放松血管平滑肌。我们通过专注于THR495进行了两种串扰的研究，直到现在，Rho-kinase的效果才尚未阐明，在两个磷酸化位点（THR495和SER1177）中，对于控制eNOS活性很重要。（结果）在体外系统中，已确认活性的Rho-kinase磷酸化THR495。在体内，在表达活化的Rho或活化的Rho激酶的COS-7细胞中证实了THR495的磷酸化水平的升高。我们还透露，随着时间的推移，当培养的内皮细胞用凝血酶刺激的THR495的磷酸化水平的变化与Rho-激酶活性水平的变化一致。体内实验还证实，用Rho-激酶抑制剂治疗细胞可显着抑制THR495的磷酸化水平。（讨论和摘要）上述实验结果表明，Rho-kinase直接磷酸化ENOS THR495。由于eNOS被THR495的磷酸化灭活，因此我们的结果表明，当Thr495直接被Rho-kinase磷酸化时，ENOS活性被抑制。我们的发现表明，先前报道的Rho-激酶抑制剂对心血管系统的治疗作用的机制涉及通过增强eNOS激活和无生产来改善血管内皮功能的影响。