抗原ペプチド/MHC分子高結合性CTLの誘導を指標とした腫瘍抗原の同定

以与抗原肽/MHC分子高度结合的CTL诱导为指标来鉴定肿瘤抗原

基本信息

批准号：
16659252
负责人：
中尾眞二
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

白血病細胞では綱胞周期調節タンパクであるCDK2,CDK4タンパクが過剰発現しており,HLA-A^*2402健常者ではCDK2,CDK4タンパク由来のCDK2_<167-175>,CDK4_<179-187>ペプチドに対するT細胞の末梢性トレランスが不完全であることを昨年までに確認した.HLA一致同種造血幹細胞移植(allo-SCT)ドナーの末梢血単核細胞から,magnetic beadsを用いて分離したCD8陽性ナイーヴT細胞を,CDK2_<167-175>ペプチドをパルスしたA24-T2(CDK2_<167-175>-T2)とCDK4_<179-187>-T2で繰り返し刺激してCDK2_<167-175>ペプチド特異的CTL(CDK2_<167-175>-CTL)とCDK4_<179-187>-CTLを誘導した後に,CDK2とCDK4タンパクを過剰発現している患者白血病細胞と,同じ患者由来でCDK2とCDK4タンパクを過剰発現していないEpstein-Barrウイルス形質変換B細胞株(EBV-LCL),ドナー由来のEBV-LCL,ドナー骨髄単核細胞(BMMC)に対するCDK2_<167-175>-CTLとCDK4_<179-187>-CTLの反応性を検討した.CDK2_<167-175>-CTLとCDK4_<179-187>-CTLは,白血病細胞と共培養するとIFNγを放出したが,患者由来のEBV-LCL,ドナー由来のEBV-LCL, BMMCと共培養してもIFNγを放出しなかった.この結果から,健常ドナー由来のCDK2_<167-175>-CTLとCDK4_<179-187>-CTLは患者白血病細胞とEBV-LCL細胞でのCDK2_<167-175>とCDK4_<179-187>の発現量の差を認識して,患者白血病細胞のみを特異的に傷害したことが明らかとなり,健常ドナーの末梢血中には白血病細胞が過剰発現している自己抗原CDK2_<167-175>,CDK4_<179-187>に対する抗原ペプチド/MHC分子高結合性CTLが存在していると考えられた.従ってallo-SCT後CDK2_<167-175>及びCDK4_<179-187>ペプチドワクチンを患者に投与して抗原ペプチド/MHC分子高結合性CTLを効率よく増殖させることが出来れば,移植片対白血病効果を誘導できる可能性が示唆された.さらにこの可能性を裏付けるために,CDK2_<167-175>/HLA-A24マルチマー,CDK4_<179-187>/HLA-A24マルチマーを用いて,allo-SCTを受けた患者末梢血中のCDK2_<167-175>-CTLとCDK4_<179-187>-CTLの有無と移植片対白血病効果との関連性を検討した.

CDK2和CDK4蛋白是细胞周期调节蛋白，在白血病细胞中过度表达，而在HLA-A^*2402健康个体中，源自CDK2和CDK4蛋白的CDK2_<167-175>和CDK4_过度表达。去年，我们证实T细胞对<179-187>肽的外周耐受是不完全的。使用珠子分离的 CD8 阳性初始 T 细胞用 A24-T2 (CDK2_<167-175>-T2) 和 CDK4_<179-187>-T2 反复刺激，并用 CDK2_<167-175> CDK2_< 进行脉冲。诱导167-175>肽特异性CTL（CDK2_<167-175>-CTL）和CDK4_<179-187>-CTL后，患者白血病细胞过表达CDK2和CDK4蛋白，并且来自具有CDK2和CD的同一患者CDK2_<167-175>-CTL 和 CDK4_< 针对不过度表达 K4 蛋白的 Epstein-Barr 病毒转化 B 细胞系 (EBV-LCL)、供体来源的 EBV-LCL、供体骨髓单核细胞 (BMMC) 1我们研究了 79-187>-CTL 的反应性。CDK2_<167-175>-CTL 和 CDK4_<179-187>-CTL 与白血病细胞共培养时释放 IFNγ，但患者来源的 EBV-LCL 、供体来源的EBV-拼箱，即使与BMMC共培养，IFNγ也不会释放。该结果表明来自健康供体的CDK2_<167-175>-CTL和CDK4_<179-187>-CTL可有效促进患者白血病细胞和EBV-LCL细胞。认识CDK2_<167-175>和CDK4_<179-187>表达水平的差异。结果发现，患者的白血病细胞受到特异性损伤，健康捐献者外周血中白血病细胞中过度表达的自身抗原CDK2_<167-175>和CDK4_<179-187>被认为是存在与抗原肽/MHC分子高度结合的CTL。因此，同种异体如果在SCT后给患者注射CDK2_<167-175>和CDK4_<179-187>肽疫苗，与抗原肽/MHC分子高度结合的CTL可以有效增殖，可以诱导移植物抗白血病效应为了进一步支持这种可能性，CDK2_ 被提出。使用<167-175>/HLA-A24多聚体和CDK4_<179-187>/HLA-A24多聚体、CDK2_<167-175>-CTL和CDK4_<179-我们研究了187>-的存在或不存在之间的关系。 CTL 和移植物抗白血病效应。