抗原特異的T細胞のクロノタイプ解析を利用した新規マイナー組織適合抗原の同定

使用抗原特异性 T 细胞的克隆型分析鉴定新型次要组织相容性抗原

基本信息

批准号：
14657243
负责人：
中尾眞二
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

平成14年末にドナーリンパ球輸注(DLI)を行った慢性骨髄性白血病患者について、抗原特異的なT細胞の増殖の有無を調べたところ、これまでの4例と同様に、DLI後8週の末梢血においてBV11陽性T細胞クローンの一過性増殖が認められた。このT細胞はCD4陽性であった。このT細胞がDLIによって患者に移入されたものか、あるいは元々患者の流血中に存在していたものかを明らかにするため、T細胞クロノタイプ特異的なreal-time PCRを用いてT細胞の定量を試みている。一方、この患者のBV11陽性T細胞クローンについては、類似のクロノタイプを持つ既知のT細胞クローンを見出し得なかったため、以前の研究で同定した多型接着分子がマイナー組織適合抗原(minor histocompatibility antigen, mHa)として機能するか否かを検討した。平成14年度の研究により、多型接着分子の一つCD62LがGVHD方向に不一致である場合に限り、白血病の再発率が有意に低下することが明らかとなった。症例を追加した本年度の研究により、HLA-A24陽性例のみを対象とした解析でも同様の結果が得られた。そこで、CD62Lの多型部位を含む9種類のペプチドを作成し、GVHD方向に不一致を示すHLA-A24陽性患者5例の移植後T細胞を、ペプチドでパルスした樹状細泡で刺激したところ、一部のペプチドがインターフェロン産生を誘導した。また、そのペプチドの一つCD62L^<206-21 IS>を用いて骨髄T細胞を繰り返し刺激したところ、ペプチド特異的な細胞傷害活性を有するCD8陽性T細胞株が樹立できた。このペプチドとHLA-A24によるテトラマーを作製したところ、ペプチド特異的なCD8陽性T細胞の中にテトラマー陽性細胞が検出された。以上から、CD62L^<206-21 IS>はHLA-24拘束性のmHaとして機能している可能性が示された。

我们调查了2002年底接受供体淋巴细胞输注（DLI）的慢性粒细胞白血病患者的抗原特异性T细胞增殖情况。与之前的4例一样，我们发现DLI后8周出现了BV11-的短暂增殖。外周血中观察到阳性T细胞克隆。该 T 细胞呈 CD4 阳性。为了弄清楚这些 T 细胞是通过 DLI 转移到患者体内还是最初存在于患者的血液中，我们使用 T 细胞克隆型特异性实时 PCR 来检测 T 细胞。另一方面，对于该患者的BV11阳性T细胞克隆，由于无法找到具有相似克隆型的已知T细胞克隆，因此我们研究了先前研究中鉴定出的多态性粘附分子是否具有mHa的功能）。 2002年的研究表明，只有当多态性粘附分子CD62L在GVHD方向错配时，白血病的复发率才会显着降低。今年的研究包括了更多病例，在仅分析 HLA-A24 阳性病例时得出了类似的结果。因此，我们创建了九种含有 CD62L 多态性区域的肽，并刺激了 5 名 HLA-A24 阳性患者的移植后 T 细胞，显示 GVHD 方向与用肽脉冲的树突状气泡不匹配。此外，当使用其中一种肽CD62L^<206-21 IS>重复刺激骨髓T细胞时，建立了具有肽特异性细胞毒活性的CD8阳性T细胞系。当使用该肽和 HLA-A24 创建四聚体时，在肽特异性 CD8 阳性 T 细胞中检测到四聚体阳性细胞。这些结果表明CD62L^<206-21 IS>可能起到HLA-24限制性mHa的作用。