癌遺伝子Wip1ホスファターゼの新規基質分子の同定とアポトーシス制御機構の解明

癌基因 Wip1 磷酸酶新型底物分子的鉴定及凋亡控制机制的阐明

基本信息

批准号：
16657035
负责人：
武川睦寛
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16657035/
关键词：
DNA損傷脱リン酸化酵素癌

项目摘要

Wip1(PPM1D)は細胞がDNA損傷などのさまざまなストレス刺激を受けた際に、がん抑制遺伝子であるp53依存的に発現誘導される遺伝子として同定されたPP2C型のセリン/スレオニン脱リン酸化酵素である。最近、乳がん、卵巣がん等において高頻度にWip1の遺伝子増幅と蛋白質の発現亢進が起きていることが示された。また、臨床研究の結果から、この様ながん細胞を持つ患者は予後不良であることが報告されており、Wip1が新たながん遺伝子として注目を集めている。しかしながら、Wip1の生理機能や発がん制御における役割はほとんど明らかにされていない。本研究ではWip1の生理機能と発がんにおける役割を解明し、がんに対する新たな治療法開発への応用を目指して、Wip1の新たな基質分子の同定を試みた。まず、Wip1をテトラサイクリン誘導性に発現するヒト細胞株を樹立し、この細胞に紫外線や放射線刺激を加えた後、免疫沈降を行ってWip1と特異的に結合して共沈してくる蛋白質分子を分離・精製した。さらにプロテオミクスの手法を用いて、これらの蛋白質分子の同定を試みた。その結果、Wip1の新たな基質の候補として、複数の蛋白質分子を同定することが出来た。さらに、同定した蛋白質分子の特異抗体を用いてWip1との結合を確認した。また、これらの分子がWip1によってin vivoで脱リン酸化されることを確認するため、生化学的解析を開始した。

WIP1（PPM1D）是PP2C型丝氨酸/苏氨酸去磷酸化酶，当细胞经历各种应激刺激（例如DNA损伤）时，已被鉴定为以p53依赖性方式诱导的基因，以p53依赖性方式诱导。最近，已经表明，WIP1基因扩增和蛋白质表达经常发生在乳腺癌，卵巢癌和其他癌症中。此外，临床研究报告说，这样的癌细胞患者预后较差，WIP1吸引了作为一种新的癌症基因的注意。但是，WIP1在生理功能和致癌作用中的作用尚未澄清。在这项研究中，我们阐明了WIP1在癌变中的生理功能和作用，并试图鉴定新的WIP1底物分子，目的是应用新的癌症治疗方法。首先，建立了表达WIP1诱导四环素的人类细胞系，并在应用于细胞的紫外线或辐射刺激后，进行了免疫沉淀以分离特异性结合与WIP1和codecipitate的分离和纯化的蛋白质分子。此外，我们尝试使用蛋白质组学技术鉴定这些蛋白质分子。结果，多种蛋白质分子能够被鉴定为WIP1新底物的候选物。此外，使用已鉴定的蛋白质分子的特异性抗体证实与WIP1的结合。此外，开始生化分析以证实这些分子通过WIP1在体内脱磷酸化。