卵子成熟時に獲得する哺乳類初期胚でのアポトーシス回避機構の解析

卵母细胞成熟过程中获得的早期哺乳动物胚胎的凋亡避免机制分析

基本信息

批准号：
12770936
负责人：
鈴木治
金额：
$ 1.79万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

卵子形成時には胚発生能が獲得されるが、卵子成熟培養系の向上にはその獲得機構の解明は非常に重要な課題である。既にBDF1雌マウス17日齢由来卵子と24日齢由来卵子を体外成熟させ、体外受精、体外培養を行なうと胚発生能(具体的には胚盤胞形成能)に有意な差があることを見いだしている。そこで、この発生能の差異を利用して、卵子形成時における胚発生能関連遺伝子の検索を行なった。17および24日齢のBDF1雌マウス16匹ずつより得られた体外成熟卵子(それぞれ、538個と531個)より得たRNAからcDNAライブラリを作成し、遺伝子発現パターンの違いをDifferential display法により調べた。17日齢由来卵子と24日齢由来卵子との間でPCRによる増殖量に差があるPCR産物58個を単離し、サンガー法によってPCR産物のDNA配列を直接決定出来たものは15個であった(現在も配列決定を継続中)。その内、既知の配列は8個で、残りは未報告、もしくは未同定配列(配列は決定されているが遺伝子の性質は未知)であった。卵子で発現することが知られているGDF-9のほか、増殖因子のHDGF、細胞分裂関連遺伝子のEg5等が見られた。ただし、現時点では候補を見いだしたに過ぎず、これらの遺伝子が真の差異発現遺伝子かどうかは、今後ノーザン解析やReal-Time PCR等により、正確に定量する必要がある。前年度報告したようにBDF1においてはB6SJLF1に比べ胚発生時のアポトーシスの関与は現れにくいと思われるが、BDF1卵子においてアポトーシス時に働くcaspaseの基質となりうるdynein light chain遺伝子の差異発現が検出され、卵胞成熟にアポトーシス関連遺伝子の発現が関与する可能性が示された点は非常に興味深いと思われる。

胚胎发育能力是在卵母细胞形成过程中获得的，阐明获得机制是改进卵母细胞成熟培养系统的一个非常重要的问题。我们已经证明，17日龄和24日龄BDF1雌性小鼠的卵子在体外成熟并进行体外受精和体外培养时，胚胎发育能力（具体来说，囊胚）存在显着差异。形成能力）。因此，我们利用这种发育能力的差异来寻找卵母细胞形成过程中与胚胎发育能力相关的基因。从 16 只 17 日龄和 24 日龄 BDF1 雌性小鼠的体外成熟卵母细胞（分别为 538 颗和 531 颗）获得的 RNA 构建了 cDNA 文库，并使用差异显示法研究了基因表达模式的差异。。我们分离了17日龄鸡蛋和24日龄鸡蛋之间PCR增殖量存在差异的58个PCR产物，并能够使用桑格法直接确定15个PCR产物的DNA序列（测序仍在进行中）。正在进行中）。其中，有八个序列是已知的，其余的是未报告或未鉴定的序列（序列已确定，但基因的性质未知）。除了已知在鸡蛋中表达的 GDF-9 之外，还观察到生长因子 HDGF 和细胞分裂相关基因 Eg5。然而，目前我们只找到了候选基因，这些基因是否是真正的差异表达基因还需要使用Northern分析、Real-Time PCR等方法进行准确定量。正如去年报道的那样，BDF1 似乎比 B6SJLF1 更不可能参与胚胎发育过程中的细胞凋亡，但在 BDF1 卵母细胞中检测到了动力蛋白轻链基因的差异表达，该基因可以是在细胞凋亡过程中起作用的半胱天冬酶的底物。而卵泡细胞凋亡相关基因的表达可能参与成熟，这是非常有趣的。