慢性骨髄性白血病の急性転化における染色体レベルでの遺伝的不安定性の機構の解明

阐明慢性粒细胞白血病急变过程中染色体水平遗传不稳定性的机制

基本信息

批准号：
12770562
负责人：
田中耕三
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

慢性骨髄性白血病をはじめとする腫瘍において認められる染色体異常と、相同組換え遺伝子との関連を調べる目的で、当研究室でクローニングした新規ヒト相同組換え遺伝子RAD54Bの機能解析を行った。Rad54Bは、Rad51による組換え反応を促進する作用を持つRad54と相同性を有している。Rad54B蛋白質を精製し生化学的機能を検討したところ、Rad54BはRad54同様2本鎖DNA依存性ATPase活性を有し、1本鎖および2本鎖DNAと結合することがわかった。一方酵母にはRAD54類似遺伝子TID1/RDH54が存在する。Rad54BとTid1/Rdh54は、Rad54との相同性が低いN端側の領域で相同性を有し、この相同領域が種を超えて保存されていることから、RAD54BはTID1/RDH54のヒトホモローグであると考えられる。しかしRad54BはTid1/Rdh54と異なりRad51,Dmclと直接には会合せず、機能的に異なる部分を有することが示された。次にヒト大腸癌細胞株HCT116においてRAD54Bをノックアウトして生物学的機能を検討したところ、著明なtargeted integrationの頻度の低下が認められ、RAD54Bが相同組換えに関与していることが示された。酵母ではRAD54が姉妹染色分体を介した組換えに関与するのに対して、TID1/RDH54は相同染色体を介した組換えに関与することが知られている。RAD54BがTID1/RDH54のヒトホモローグであるとすると、RAD54Bも相同染色体を介した組換えに関与していることが予想される。腫瘍において認められる染色体転座などの異常は、姉妹染色分体以外の染色体間での組換えの結果である可能性があり、RAD54Bがこの過程に関与していることが予想されるため、今後この可能性を検討していく予定である。

为了研究同源重组基因与慢性粒细胞白血病等肿瘤中观察到的染色体异常之间的关系，我们对实验室克隆的新型人类同源重组基因RAD54B进行了功能分析。 Rad54B与Rad54具有同源性，具有促进Rad51重组反应的作用。当我们纯化Rad54B蛋白并检查其生化功能时，我们发现Rad54B与Rad54一样，具有双链DNA依赖的ATP酶活性，并与单链和双链DNA结合。另一方面，酵母中存在RAD54样基因TID1/RDH54。 Rad54B和Tid1/Rdh54在N末端区域具有同源性，与Rad54的同源性较低，并且该同源区域在物种间保守，因此认为RAD54B是TID1/RDH54的人类同源物。然而，与Tid1/Rdh54不同，Rad54B并不直接与Rad51和Dmcl相关，这表明它们具有功能上不同的部分。接下来，当我们在人结肠癌细胞系HCT116中敲除RAD54B并检查其生物学功能时，我们观察到靶向整合的频率显着降低，表明RAD54B参与了Ta的同源重组。在酵母中，RAD54 参与通过姐妹染色单体的重组，而已知 TID1/RDH54 参与通过同源染色体的重组。如果 RAD54B 是 TID1/RDH54 的人类同源物，则预计 RAD54B 也参与通过同源染色体的重组。在肿瘤中观察到的染色体易位等异常可能是姐妹染色单体以外的染色体之间重组的结果，预计RAD54B将参与这一过程。