遺伝子改変F9細胞株を用いた生体バリアの機能解析

使用转基因 F9 细胞系进行生物屏障功能分析

• 批准号: 12770114
• 负责人: 千葉 英樹
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770114/
• 关键词: F9; ノックアウト細胞; 遺伝子発現誘導; Cre; loxP; タイト結合; クローディン; レチノイド; 核内受容体; クローデイン

タイト結合は、上皮・内皮の最も内腔側に存在する細胞間接着装置で、細胞間の選択的透過性を制御するバリア機能の本態である。近年いくつかのタイト結合関連分子が見い出されており、膜貫通分子claudinは少なくとも20種類からなる遺伝子ファミリーを形成することが明らかとなった。マウスF9細胞株は、レチノイン酸存在下で培養すると、上皮様細胞に分化する。我々は、F9細胞株にリガンド依存性Creリコンビナーゼ(Cre-ER^T)とreverse tetracycline-controlled transactivator (rtTA)を恒常発現させ、多数の遺伝子の導入・ノックアウトと遺伝子発現の時間的・量的調節が行なえる遺伝子改変F9細胞株(F9:rtTA : Cre-ER^T L32T2)を樹立した(Exp.Cell Res.260,334-339,2000)。また本細胞株を用いて、1)レチノイン酸がclaudin-6,claudin-7,occludin分子の発現や、タイト結合のバリア機能を誘導すること、2)タイト結合の新生過程では、小さな分子に対するバリアが大きな分子に比べて先行して形成されること、3)レチノイン酸がタイト結合に及ぼす作用は、特定のレチノイドX受容体-レチノイン酸受容体(RXR-RAR)二量体によって伝達されることを示した(Exp.Cell Res.263,163-172,2001)。本細胞株は、生体バリアの本態であるタイト結合の構築・機能・制御機構を分子レベルで明らかにし、タイト結合の破綻による種々の病態の成立・治療に貴重な情報を提供することが期待される。

紧密连接是存在于上皮和内皮最内侧的细胞间粘附装置，是控制细胞间选择性通透性的屏障功能的本质。近年来发现了多种紧密连接相关分子，其中跨膜分子claudin形成了一个由至少20种类型组成的基因家族。当在视黄酸存在下培养时，小鼠 F9 细胞系分化为上皮样细胞。我们在F9细胞系中不断表达配体依赖性Cre重组酶（Cre-ER^T）和反向四环素控制反式激活子（rtTA），引入并敲除大量基因，并控制时间和数量的基因表达。建立了转基因 F9 细胞系 (F9:rtTA: Cre-ER^T L32T2)，可以执行 (Exp.Cell决议 260, 334-339, 2000）。使用该细胞系，我们还证明：1）视黄酸诱导claudin-6、claudin-7和occludin分子的表达以及紧密连接的屏障功能； 3) 视黄酸对紧密连接的作用是由特定的类维生素A X 受体-视黄酸受体 (RXR-RAR) 二聚体介导的 (Exp.Cell)。决议 263, 163-172, 2001)。该细胞系有望在分子水平上阐明紧密连接的构建、功能和控制机制，这是生物屏障的本质，并为紧密连接破坏引起的各种病理状况的建立和治疗提供有价值的信息。茹。

项目成果

千葉英樹: "培養細胞における新しい遺伝子ノックアウト法"「実験医学」クローズアツプ実験法1999-2001. (印刷中).

千叶秀树：“培养细胞中的新基因敲除方法”《实验医学》特写实验方法1999-2001（出版中）。

Li M. et al.: "RXR α ablation in skin keratinocytes results in alopecia and epidermal alterations"Development. 128. 675-688 (2001)

Li M. 等人：“皮肤角质形成细胞中的 RXR α 消融导致脱发和表皮改变”开发。 128. 675-688 (2001)。

Igarashi Y. et al.: "Expression of receptors for glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) and neurturin in the inner blood-retinal barrier of rats."Cell Struct.Funct.. 25. 237-241 (2000)

Igarashi Y. 等人：“大鼠内血视网膜屏障中胶质细胞系衍生神经营养因子 (GDNF) 和神经营养因子受体的表达。”Cell Struct.Funct.. 25. 237-241 (2000)

Chiba, H. et al.: "F9 embryonal carcinoma cells engineered for tamoxifen-dependent Cre-mediated site-directed mutagenesis and doxycycline-inducible gene expression"Exp.Cell Res.. 260. 334-339 (2000)

Chiba，H.等：“为他莫昔芬依赖性Cre介导的定点诱变和多西环素诱导的基因表达而工程化的F9胚胎癌细胞”Exp.Cell Res.. 260. 334-339 (2000)

Li, M.et al.: "RXR α ablation in skin keratinocytes results in alopecia and epidermal alterations"Development. 128. 675-688 (2001)

Li, M.等人：“皮肤角质形成细胞中的 RXR α 消融导致脱发和表皮改变”开发。 128. 675-688 (2001)。