生体バリアー関連分子の同定と機能解析に関する研究

生物屏障相关分子的鉴定及功能分析研究

• 批准号: 10770102
• 负责人: 千葉 英樹
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770102/
• 关键词: レチノイド; 上皮; 臓器内胚芽; F9; タイト結合; 生体バリアー; Cre; lox P; 遺伝子発現誘導; ノックアウト細胞; リガンド誘導性Creリコンビナーゼ; 部位特異的遺伝子組換え; 遺伝子発現誘導システム

タイト結合は、上皮・内皮の最も内腔側に存在する細胞間接着装置で、細胞間の選択的透過性を制御するバリアー機能の本態である。近年いくつかのタイト結合関連分子が見い出されており、その相互作用が生体バリアーの形成・制御に重要な役割を果たすと想定されている。マウスF9細胞株をレチノイン酸存在下で浮遊培養すると、臓側内胚葉細胞に相当する上皮様細胞に分化し、タイト結合が新生される。我々は、リガンド誘導性Creリコンビナーゼを開発し、F9細胞株に部位特異的遺伝子組換え系と遺伝子発現誘導系を導入し、多数の遺伝子の導入・ノックアウトと遺伝子発現の時間的・量的調節が可能な複合システムを開発した(医学のあゆみ,186,705-710,1998;実験医学,17,155-158,1999;1999 FASEB Summer Research Conference)。さらに、この遺伝子改変F9細胞を用いて、レチノイドがタイト結合関連分子の発現とバリアー機能を誘導することを見い出した(投稿準備中)。本細胞株で、タイト結合関連分子の遺伝子を破壊、あるいはその発現を時間的・量的に誘導することによって、タイト結合の構築・機能・制御機構を分子レベルで明らかにすることが可能である。本研究は、生体バリアーの破綻による種々の病態の成立・治療に貴重な情報を提供することが期待される。

紧密连接是存在于上皮和内皮最管腔一侧的细胞间粘附装置，是控制细胞间选择性通透性的屏障功能的本质。近年来发现了几种紧密连接相关分子，它们的相互作用被认为在生物屏障的形成和控制中发挥着重要作用。当小鼠F9细胞系在视黄酸存在下悬浮培养时，它分化为与内脏内胚层细胞相对应的上皮样细胞，并产生新的紧密连接。我们开发了配体诱导的Cre重组酶，并将位点特异性基因重组系统和基因表达诱导系统引入F9细胞系，从而实现了众多基因的导入和敲除以及基因表达的时间和定量调控。可能的复杂系统（医学史，186, 705-710, 1998；实验医学，17, 155-158, 1999；1999 FASEB 夏季研究会议）。此外，使用这些转基因 F9 细胞，我们发现类视黄醇诱导紧密连接相关分子和屏障功能的表达（为提交做准备）。通过破坏紧密连接相关分子的基因或在该细胞系中暂时和定量地诱导其表达，可以在分子水平上阐明紧密连接的构建、功能和控制机制。这项研究有望为生物屏障破坏引起的各种病理状况的建立和治疗提供有价值的信息。

项目成果

Kojima,T.et al.: "Inducation of tight junctions in human connexin 32(hCx32)-transfected mouse hepatocytes:Connexin 32 interacts with occludin."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 222-229 (1999)

Kojima,T.等人：“在人连接蛋白 32(hCx32) 转染的小鼠肝细胞中诱导紧密连接：连接蛋白 32 与 occludin 相互作用。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 222-229 (1999)

千葉英樹: "培養細胞における新しい遺伝子ノックアウト法"実験医学. 17. 155-158 (1999)

千叶秀树：“培养细胞中的新基因敲除方法”实验医学17。155-158（1999）。