アグロバクテリウムを用いたダイズの高効率形質転換系の開発

利用农杆菌开发大豆高效转化系统

基本信息

批准号：
12760008
负责人：
穴井豊昭
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Saga University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760008/
关键词：
ダイズアグロバクテリウムヘルパープラスミド VirG

项目摘要

本研究では、現在のところ効率的な外来遺伝子導入系が確立されていないダイズに対して、アグロバクテリウムを用いた外来遺伝子の導入法を適用することを目的として、新規ベクター系の開発と外来遺伝子導入効率の改善を試みた。本年度は、昨年度作成したpBio542の活性化VirG遺伝子を組み込んだヘルパープラスミドを保持するアグロバクテリウムLBM4404株を用いて、遺伝子導入実験を行った。その結果、イネカルスに対して今回作成したヘルパープラスミドを保持する菌株を用いた場合には、アセトシリンゴン(AS)非存在下で通常のLBA4404株を用る場合より数倍高い効率で外来遺伝子の導入が可能であった。しかしながら、100mg/lのAS存在下では導入効率に有意な差は認められず、ダイズ不定胚に対する感染効率の向上は認められなかった。また、ダイズ不定胚に対するアグロバクテリウムの感染効率に対する超音波処理および減圧浸潤処理の効果についても検討を行ったところ、一過的な遺伝子発現効率については多少の増加が認められたものの、安定した形質転換体を得るには至らなかったことから、ダイズに対するアグロバクテリウムを介した外来遺伝子導入系の確立のためには、更なる改良が必要であると考えられる。

在本研究中，我们旨在将利用农杆菌的外源基因导入方法应用于尚未建立有效的外源基因导入系统的大豆，我们试图提高基因转移效率。今年，我们使用农杆菌菌株 LBM4404 进行了基因转移实验，该菌株携带一个辅助质粒，其中包含我们去年创建的 pBio542 的激活 VirG 基因。结果，当使用携带本次创建的水稻愈伤组织辅助质粒的菌株时，与使用不存在乙酰丁香酮(AS)的正常LBA4404菌株时相比，可以将外源基因转移效率提高数倍。它。然而，在100mg/l AS存在下，导入效率没有观察到显着差异，并且没有观察到大豆体细胞胚的感染效率提高。我们还研究了超声处理和真空渗透处理对大豆体细胞胚中农杆菌感染效率的影响，发现虽然观察到瞬时基因表达效率略有增加，但基因表达效率没有稳定增加。由于没有获得转化体，因此认为需要进一步改进以建立通过农杆菌将外源基因引入大豆的系统。