オーキシン合成酵素、及びシグナル伝達系に関わる遺伝子の単離、解析

生长素合酶及信号转导系统相关基因的分离与分析

基本信息

批准号：
12740442
负责人：
澤進一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、シロイヌナズナをモデル植物として、Affymetrix社のマイクロアレイを用いてオーキシンにより早期に応答し、発現が影響を受ける因子を網羅的に解析した。その結果HAT2遺伝子発現が顕著なオーキシン誘導性を示した。HAT2過剰発現株の解析からHAT2遺伝子は地上部ではオーキシンシグナルを正に制御し、地下部では負に制御することを示唆した。さらに、オーキシンによるHAT2遺伝子発現誘導はユビキチンリガーゼE3の突然変異体であるtir1により抑制された。このことはHAT2がユプロテオソームによるタンパク質レベルでの制御を受けていることを示唆している。また、HAT2の過剰発現体では内生のHAT2遺伝子発現が抑制されていた。逆に、HAT2のDNA結合ドメイン,転写活性化ドメインVP16,及び誘導系GRドメインを用いたHAT2タンパク質の下流因子の発現誘導系を用いた解析ではHAT2自身の発現が誘導された。さらにHAT2の発現はタンパク質合成阻害剤であるシクロヘキシミドによっても顕著に誘導された。これらのことから、HAT2タンパク質は負の転写調節因子として機能し、プロテオソームによるタンパク質の安定性に関する制御を受け、自己の遺伝子発現を制御していることが示唆された。今後はこのHAT2遺伝子の分子遺伝学的、生化学的解析を進めこのモデルを検証することがオーキシンの作用機構の解明につながると考えている。

在这项研究中，使用拟南芥作为模型植物，我们使用Affymetrix的微阵列对生长素提早反应，并全面分析影响表达的因素。结果，HAT2基因的表达显着辅助诱导。 HAT2过表达菌株的分析表明，HAT2基因在高度处积极调节生长素信号，并在高度下进行负调节。此外，生长素通过泛素连接酶E3的突变体Tir1抑制了HAT2基因表达。这表明HAT2受Yuproteosomes在蛋白质水平上调节。此外，HAT2过表达器抑制了内源性HAT2基因表达。相反，使用HAT2的DNA结合域，转录激活结构域VP16和诱导GR结构域的DNA结合域使用HAT2蛋白下游因子的表达诱导剂系统进行分析，诱导了HAT2本身的表达。此外，HAT2的表达是由蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺显着诱导的。这些结果表明，HAT2蛋白是负转录调节剂，并且受蛋白质稳定性的蛋白质体控制，并调节其自身基因表达。我们认为，将来，我们将继续对该HAT2基因进行分子遗传和生化分析并验证该模型，这将导致阐明生长素的作用机理。