セロトニン2A型受容体のラット小脳特異的サブタイプのクローニング

大鼠小脑特异性血清素 2A 型受体亚型的克隆

基本信息

批准号：
11780573
负责人：
成田正明
金额：
$ 1.41万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780573/
关键词：
セロトニンセロトニン受容体セロトニン2A型受容体小脳

项目摘要

本研究の目的はラットにおけるセロトニン(5-HT)2A型受容体(5-HT2AR)の小脳型サブタイプのクローニングである。研究代表者は本格的なクローニング作業に入る前にまずラット小脳において5-HT2ARのmRNAが発現しているかどうかをNorthern Blotting法によって調べたところ、小脳においても大脳とほぼ同様のサイズに転写産物を認めた。さらにラット小脳RNAで既知のラット大脳型5-HT2ARの塩基配列より作製したプライマーを用いてRT-PCRを行ったところ予想されたサイズにPCR産物を検出できた。研究代表者はラット小脳cDNAを鋳型としてラット大脳型5-HT2ARの塩基配列より作製したプライマーを用いて3'及び5'-RACE法によりラット5-HT2ARの小脳型サブタイプの遺伝子を増幅し、dideoxy法により塩基配列の決定を開始したところ、小脳における5-HT2ARの塩基配列は大脳型のそれと100%の相同性を呈していた。放射性同位体標識5-HT2ARリガンドを用いた脳内マッピングなどの従来の形態学的手法を用いたこれまでの報告では、中枢神経系における5-HT2ARの分布は大脳皮質の神経細胞に限られ、小脳には全く見出されないとされていたが、今回の研究で小脳にも大脳と同じ5-HT2ARが存在することが確かめられた。しかしながら小脳に特異的な2A受容体サブタイプの存在の可能性は低いと考えられる。今後は小脳に存在する2A受容体がどのような機能を担っているのか解明していく予定である。この内容は第29回Society for Neuroscienceで発表した。研究代表者は小脳5-HT2AR遺伝子クローニングの過程で5-HT2AR遺伝子に存在するポリモルフィズム(多型)も発見、拒食症や突然死の解明のきっかけとなった。

本研究的目的是克隆大鼠血清素 (5-HT) 2A 型受体 (5-HT2AR) 的小脑亚型。在开始全面克隆工作之前，主要研究者首先使用Northern Blotting方法研究了5-HT2AR mRNA在大鼠小脑中是否表达。此外，当我们使用由大鼠小脑RNA制备的引物和已知的大鼠小脑5-HT2AR型碱基序列进行RT-PCR时，我们能够检测到预期大小的PCR产物。主要研究者以大鼠小脑cDNA为模板，以大鼠小脑型5-HT2AR的碱基序列为基础，通过3'和5'-RACE方法扩增了大鼠5-HT2AR小脑亚型的基因。通过双脱氧法测定碱基序列，我们发现小脑型5-HT2AR的碱基序列与脑型5-HT2AR的碱基序列具有100%的同源性。之前的报道使用传统的形态学方法，例如使用放射性同位素标记的5-HT2AR配体进行大脑绘图，表明5-HT2AR在中枢神经系统中的分布仅限于大脑皮层的神经元；人们认为5-HT2AR并非如此。根本没有在小脑中发现，但这项研究证实，小脑中也存在与大脑中相同的5-HT2AR。然而，小脑特异性 2A 受体亚型存在的可能性被认为很低。未来，我们计划阐明小脑中 2A 受体的功能。此内容在第 29 届神经科学学会上发表。在克隆小脑5-HT2AR基因的过程中，主要研究者还发现了5-HT2AR基因的多态性，从而阐明了厌食和猝死。