スフィンゴシン-1-リン酸による細胞運動調節の分子機構の解析

1-磷酸鞘氨醇调节细胞运动的分子机制分析

• 批准号: 11780505
• 负责人: 和田 淳
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780505/
• 关键词: スフィンゴシン1-リン酸; 細胞運動; 受容体; 細胞骨格

スフィンゴシン1-リン酸の、受容体を介した細胞運動制御機構についての解析を行った。まず、マウスの培養細胞NIH/3T3,Swiss/3T3,B16F10において、4種のスフィンゴシン1-リン酸受容体分子、Edg1,Edg3,Edg5/Agr16が、内在性に発現しているかどうかを、RT-PCR法およびノザンブロッティング法をもちいて検討した。その結果、スフィンゴシン1-リン酸によって運動を抑制されるB16F10細胞では、Edg5/Agr16の発現が高く、Edg1、Edg3は発現していないこと、一方スフィンゴシン1-リン酸が走化性因子として作用するNIH/3T3細胞、Swiss/3T3細胞では、これら3種の受容体がすべて発現していることが明らかになった。また、血球系の細胞で多く発現しているスフィンゴシン1-リン酸受容体Edg6は、これらの細胞株ではいずれも発現していなかった。次に、それぞれの受容体の発現がアクチン細胞骨格に与える影響について、CHO細胞、COS7細胞に一過性にそれぞれの受容体を発現させることで検討した。Edg5/Agr16の発現によって細胞は収縮し、このときアクチンストレスファイバーの若干の増強が見られた。Edg3の発現では、細胞膜周辺に微小突起や葉状突起が形成された。しかし、Edg6は、細胞膜表面に均一に発現しなかった。Edg1の発現は細胞形態に顕著な変化をおよぼさなかった。以上の結果から、特にB16F10細胞において、スフィンゴシン1-リン酸はEdg5を介して細胞内アクチン繊維の過剰な重合を引き起こすことにより、細胞運動を抑制していることが示唆された。

我们分析了1-磷酸鞘氨醇受体介导的细胞运动控制机制。首先，RT-使用PCR法和Northern印迹法对结果进行调查。结果，在运动被1-磷酸鞘氨醇抑制的B16F10细胞中，Edg5/Agr16的表达高，但Edg1和Edg3不表达，而1-磷酸鞘氨醇作为趋化因子发挥作用。 NIH/3T3 细胞和 Swiss/3T3 细胞中表达了多种类型的受体。此外，通常在血细胞中表达的鞘氨醇 1-磷酸受体 Edg6 在这些细胞系中均不表达。接下来，我们通过在 CHO 细胞和 COS7 细胞中瞬时表达每种受体来研究每种受体的表达对肌动蛋白细胞骨架的影响。 Edg5/Agr16的表达导致细胞收缩，此时，观察到肌动蛋白应力纤维的一些增强。当 Edg3 表达时，细胞膜周围形成微突起和叶。然而，Edg6在细胞膜表面的表达并不均匀。 Edg1的表达不会引起细胞形态的任何显着变化。上述结果表明，1-磷酸鞘氨醇通过Edg5引起细胞内肌动蛋白纤维过度聚合来抑制细胞运动，尤其是在B16F10细胞中。