中枢刺激薬による長期持続性脳障害の分子メカニズムの解析

中枢兴奋剂引起持久性脑损伤的分子机制分析

基本信息

批准号：
11770569
负责人：
梶井靖
金额：
$ 1.34万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

行動感作の成立は発達段階に依存し、ラットにおいては生後3週以降に認められ、また、コカイン等の他の薬物との交叉を示す。mrtlは覚醒剤であるメタンフェタミン(MAP)への応答がこの臨界期以降に特異的な新規遺伝子として単離され、1)MAP急性単回投与に対する一過性の発現増強、2)コカインに対する交叉応答性、3)薬物応答のドーパミンD1受容体依存性、4)mrtl翻訳開始点特異的なアンチセンスオリゴマーによる行動感作成立阻害、5)行動感作成立ラットにおける発現増強の長期持続、といった特徴から行動感作への関与が示されてきた。本年度は、mrtl遺伝子産物(MrtlA、MrtlB)を特異的に認識する抗体を用いてその局在を解析を行った。MrtlA、MrtlBに共通するN末端に対する抗体(α-pan-Mrtl)は、ラット大脳新皮質抽出液のウェスタンブロット上で62kDaのバンドを検出し、各C末端に特異的な抗体(α-MrtlA,α-MrtlB)も同様に62kDaのバンドを認識した。α-pan-Mrtl、α-MrtlBが認識する62kDaの蛋白質はsynaptosome画分に濃縮され、PSD画分では検出されないことからプレシナプスへの局在が示唆されたが、α-MrtlAではsynaptosome、PSDへの濃縮は認められなかった。α-pan-Mrtlによる免疫組織染色像において、強いMrtl様免疫反応が海馬CAlや大脳皮質の錐体細胞の樹状突起に沿って小さな点状に認められた。以上のように、mRNAレベルでMAP応答性を示すMrtlBが特異的にプレシナプスに局在することが示唆された。PDZ蛋白質群は分子的足場としてシナプス可塑的性に関与することが指摘されており、今後、新規プレシナプスPDZ蛋白質MrtlBの機能を明らかにすることによって、行動感作成立メカニズムの理解が大きく進展すると期待される。

行为敏化的建立取决于发育阶段，在3周龄后在大鼠中观察到，也表明与其他药物（例如可卡因）交叉。自从这个关键时期以来，MRTL已被分离为一种针对甲基苯丙胺（MAP）的新型基因，并且其参与行为敏化的参与已通过：1）以下特征表明：1）表达对单个急性MAP给药的暂时增强，2）对可卡因的交叉反应性，3）多巴胺D1受体D1受体依赖性依赖性依赖性的元素，4） MRTL翻译起点和5）具有行为感觉的大鼠增强表达的长期持久性。今年，使用专门识别MRTL基因产物的抗体分析了MRTL基因产物（MRTLA，MRTLB）的定位。 MRTLA和MRTLB（α-PAN-MRTL）常见的N末端的抗体检测到大鼠脑新皮质提取物的蛋白质印迹上的62 kDa频带，并且针对每个C-末端（α-MRTLA，α-MRTLB，α-MRTLB）的抗体类似地识别了一个62 KDA。通过α-PAN-MRTL识别的62 kDa蛋白和α-MRTLB在突触组分数中富集，在PSD级分中未检测到，这表明其定位在促肿瘤前，但在α-MRTLA中没有观察到突触体或PSD的富集。在用α-PAN-MRTL的免疫组织化学染色中，在沿着海马CAL的树突和大脑皮层锥体细胞的树突中观察到了强烈的MRTL样免疫反应。如上所述，有人提出在mRNA水平上表现出地图响应性的MRTLB特别定位于散发前。有人指出，PDZ蛋白质基团作为分子支架参与突触可塑性，并且可以通过阐明新型突触前PDZ蛋白MRTLB的功能来大大改善对产生行为感觉机制的理解。