ヒトSpt4&Spt5複合体による転写制御機構

人类Spt4&Spt5复合物的转录控制机制

• 批准号: 10780381
• 负责人: 和田 忠士
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780381/
• 关键词: 転写; 転写伸長反応; 転写阻害剤; 転写伸長因子; DSIF; NELF; P-TEFb; FACT; 転写制御; 阻害剤; 欠失変異体; ドミナントネガティブ

DSIF(DRB sensitivity-inducing factor)は転写阻害剤DRBやH-8の転写阻害に必須な転写因子として同定されたもので、DSIFp160とDSIFp14の2つのサブユニットから構成される。p160,p14はそれぞれ酵母Spt5、Spt4のヒト相同性因子で、RNAポリメラーゼIIに結合してその活性を制御する。生化学的解析から、DSIFは転写伸長反応を負に制御する場合と正に制御する活性を有し、負の制御には、新規の転写伸長因子NELF(negative elongation factor)の関与が示された。さらに、今までの私の研究から、DSIFとNELFによる転写制御は、P-TEFb(positive elongation factor b)により解除され、その制御はRNAポリメラーゼIIの最大サブユニットのC末端ドメイン(CTD)のリン酸化と密接に関連していることが明らかとなった。さらに今年度は、組み換えタンパク質とアフィニティー精製したタンパク質を用いて、高度に純化されたタンパク質による試験管内転写再構成系を確立し、DSIF、NELFおよびP-TEFbによる転写伸長反応制御機構を検討した。その結果、ヒストンH2AおよびH2Bと選択的に相互作用し、クロマチン構造を有した鋳型DNAからの転写伸長反応に関与する因子、FACT(facilitate chromatin transcription)が、P-TEFbと協調的に働いてDSIF/NELFによる転写阻害を解除することを見出した。

DSIF（DRB敏感性诱导因子）被确定为转移因子，对于转移抑制剂DRB和H-8的转移至关重要，由两个亚单位组成，即DSIFP160和DSIFP14。 p160和p14是酵母SPT5和SPT4人类同源因素，它们与RNA聚合酶II键合粘合以控制其活性。基于生化分析，DSIF具有控制转录延伸反应的活性，负面对照表明新转录扩展因子NELF（负伸长率）的参与。此外，除了我到目前为止的研究，DSIF和NELF的转移控制已由P-TEFB（阳性伸长因子B）释放，其控制是RIN，RNA聚合酶II的最大亚基C-末端（CTD），RIN是RIN。很明显，它与氧化密切相关。在这个财政年度，使用高度纯化的蛋白质，使用重组蛋白和亲和力制成的蛋白质对DSIF，NELF和P-TEFB转录的转录进行了转录。结果，事实（促进染色质转录）与Hypon H2A和H2B有选择地相互作用，涉及与染色质结构的模具DNA转移和伸长反应，与P-TEFB合作起作用。 /NELF的抑制被取消。

项目成果

J.B.Kim,T.Wada 他3人 (3番目): "Tat-SF1 Associates with Rap30 and hSpt5 proteins"Mol.Cell.Biol.. 19. 5960-5968 (1999)

J.B.Kim、T.Wada 和其他 3 人（第 3 次）：“Tat-SF1 与 Rap30 和 hSpt5 蛋白相关”Mol.Cell.Biol.. 19. 5960-5968 (1999)

Y.Yamaguchi,T.Wada,他4名: "Structure and function of the human transcription elongetion factor DSIF." J.Biol.Chem.(印刷中). (1999)

Y. Yamaguchi、T. Wada 和其他 4 人：“人类转录延伸因子 DSIF 的结构和功能”，《生物化学杂志》（1999 年）。

Y.Yamaguchi,T.Wada,他4名: "Casein kinase II interacts with bZIP domains of sevral transcription factors" Nucleic Acids Res.26巻16号. 3854-3861 (1998)

Y. Yamaguchi、T. Wada 和其他 4 人：“酪蛋白激酶 II 与多个转录因子的 bZIP 结构域相互作用”《核酸研究》第 26 卷，第 16 期。3854-3861 (1998)

H.Tsutsui,T.Wada 他5名 (5番目): "The DNA-binding and Transcriptional Activities of MAZ,a Mycassociated Zinc Finger Protein,and regulated by casein kinase II"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 262. 198-205 (1999)

H. Tsutsui、T. Wada 和其他 5 人（第 5 篇）：“MAZ（一种真菌相关锌指蛋白，并受酪蛋白激酶 II 调节）的 DNA 结合和转录活性”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 262. 198 -205 (1999)

Y.Kobe,T.Wada 他7名 (5番目): "The Role of Human MBF1 as a Transcriptional Coactivator"J.Biol.Chem.. 274. 34196-34202 (1999)

Y.Kobe、T.Wada 和其他 7 人（第 5 篇）：“人类 MBF1 作为转录辅激活因子的作用”J.Biol.Chem.. 274. 34196-34202 (1999)