アポトーシス細胞における膜リン脂質変動とそれに関与するホスホリパーゼA＿2の解析

凋亡细胞膜磷脂波动及参与其中的磷脂酶A_2分析

基本信息

批准号：
10771302
负责人：
厚味厳一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

抗Fas抗体処理あるいはTNFおよびシクロへキシミド(TNF/CHX)処理によりアポトーシスを誘導したヒト単核球系白血病細胞株のU937細胞を用いて以下に示すことを明らかにした。1: あらかじめ放射標識オレイン酸あるいはパルミチン酸標識した細胞に抗Fas抗体処理でアポトーシスを誘導した結果、放射標識アラキドン酸標識した細胞と同様に脂肪酸遊離量の増加が観察された。この脂肪酸遊離量の増加は、カルシウム非依存性ホスホリパーゼA_2(iPLA_2)の阻害剤であるmethyl arachidonylfluorophosphonate(MAFP)及びbromoenol lactoneにより阻害された。これらのことより、脂肪酸遊離へのiPLA_2の関与が強く示唆された。2: あらかじめ放射標識アラキドン酸で標識した細胞をTNF/CHX処理によりアポトーシスを誘導すると、主にトリアシルグリセロール量の増加が観察された。この増加は予想外にもMAFPにより抑制されたが、その阻害様式については現在のところ不明である。また、わずかながら観察された遊離脂肪酸量の増加もMAFPで抑制され、TNF/CHX処理細胞においても脂肪酸遊離の増加にiPLA_2が関与することが示唆された。3: 両系において、アポトーシス誘導時にMAFPを共存させると、アポトーシス初期段階(6時間まで)での細胞死が遅れた。しかし、caspase-3活性やDNAの断片化は影響を受けなかった。

据显示，使用人类单眼白血病细胞的U937细胞显示了以下所示，这些细胞通过处理抗-FAS抗体处理或通过加工来诱导凋亡。 1：由于抗辐射酸或寄生酸标记的细胞的抗-FA抗体治疗诱导凋亡的结果，观察到脂肪酸分离的增加，如辐射蛛网膜酸标记的细胞的情况。甲基蛛网膜氟磷膦（MAFP）和溴苯酚易元酮（钙非依赖性磷脂酶A_2（IPLA_2）的抑制剂）抑制了脂肪酸量的增加（IPLA_2）。强烈建议这些iPla_2参与脂肪酸的释放。 2：通过tliming通过TNF/CHX加工来诱导的细胞诱导细胞凋亡，主要增加了三氧化三烯酸甘油的量。 MAFP意外地抑制了这种增长，但抑制方式目前尚不清楚。另外，MAFP也抑制了略微观察到的游离脂肪酸的增加，这表明IPLA_2参与了TNF/CHX加工细胞中脂肪酸的增加。 3：在两侧，当MAFP在凋亡诱导期间共存时，早期（最高6小时）的细胞死亡延迟。但是，caspase-3活性和DNA片段不影响。