リソソーム膜蛋白質と細胞骨格の相互作用に関する研究

溶酶体膜蛋白与细胞骨架相互作用的研究

基本信息

批准号：
10771294
负责人：
藤田英明
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771294/
关键词：
リソソーム細胞骨格輸送シグナルアダプター蛋白質

项目摘要

リソソ-ム膜蛋白質(LGP85)の輸送シグナルである細胞質領域に結合する細胞質因子の精製を行ったところ、β-tubulinとHSP90のcomplexが同定されてきた。しかしながら精製した微小管とLGP85細胞質領域の相互作用を、affinity beadsあるいは表面プラズモン共鳴センサ-などを用いて検討を行ったところ特異的な相互作用を示すことはできなかった。次にLGP85の輸送シグナルである細胞質領域とアダプタ-蛋白質(AP-1,AP-2)との相互作用の検討を、affinity beadsあるいは表面プラズモン共鳴センサ-などを用いて行ったところ、LGP85とAP-1の相互作用は輸送シグナルであるロイシン-イソロイシンという配列に依存的であり、この相互作用がリソソ-ム膜蛋白質(LGP85)の輸送に重要であることが示唆された。さらにLGP85の細胞質領域の合成ペプチドの高次構造の解析(NMR、CDスペクトル)を行ったところ、やはりロイシン-イソロイシン依存的に異なる立体構造を取り得る可能性が示唆され、リソソ-ム膜蛋白質の輸送シグナルはその高次構造により機能発現が規定されていることが予想された。さらにリソソ-ムの生細胞内でのダイナミクスをリアルタイムで観察する目的で、LGP85とGFP(green fluorescent protein)のキメラ蛋白質の発現を試みた。現在このLGP85・GFPキメラ蛋白質の安定発現細胞株を用いて種々の薬物や小胞輸送に関わる細胞質因子の発現によるリソソ-ムの形態変化等について検討中である。

与细胞质区域结合的细胞质因子的纯化是溶酶体膜蛋白（LGP85）的转运信号，已被鉴定为β-微管蛋白和HSP90的复合物。但是，当使用亲和力珠或表面等离子体共振传感器研究纯化的微管与LGP85细胞质区域之间的相互作用时，无法显示特定的相互作用。接下来，我们使用亲和力珠或表面等离子体元素共振传感器研究了LGP85的传输信号和衔接蛋白（AP-1，AP-2）之间的胞质区域之间的相互作用。有人提出，LGP85和AP-1之间的相互作用取决于传输信号亮氨酸 - 异亮氨酸的序列，即传输信号，并且这种相互作用对于溶酶体膜蛋白（LGP85）的运输至关重要。此外，对LGP85（NMR，CD谱）中合成肽高级构象的分析表明，也有可能以亮氨酸 - 异糖素依赖性方式采用不同的三维结构，并且可以预测，它可以预测到较高的lysosos蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白质的构型。此外，我们试图表达LGP85和GFP（绿色荧光蛋白）的嵌合蛋白，以实时观察活细胞中溶酶体的动力学。目前，我们正在考虑使用该细胞系中涉及各种药物和细胞质转运的各种药物和细胞质因子的表达，该细胞系使用该细胞系表示稳定的LGP85/GFP嵌合蛋白。