チロシナーゼ分解誘導化合物によるメラノーマ腫瘍形成抑制の分子機構解明

阐明酪氨酸酶降解诱导化合物抑制黑色素瘤形成的分子机制

基本信息

批准号：
21K06556
负责人：
藤田英明
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagasaki International University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

（１）B16メラノーマを尾静脈から投与後、3種類のチロシナーゼ分解誘導化合物を腹腔内投与することで肺転移を阻害できるかについて検討したが有意差を示す化合物を見つけることができていない。また、マウスにB16メラノーマを皮下移植し腫瘍を形成させ、3種類のチロシナーゼ分解誘導化合物を腹腔内投与することで抗腫瘍効果を評価したが、現在のところ有意差を示す化合物を見つけることができていない。予備的実験では腫瘍に直接化合物を接種することで、腫瘍形成阻害を確認していたが再現性が得られなかった。（２）チロシナーゼを分解に導く膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152の作用分子機構について解析を行なっている。3XFLAG-ユビキチン発現プラスミドを用いることで、感度よくチロシナーゼのユビキチン化を検出で切るようになった。その結果、チロシナーゼユビキチン化にはRNF152の膜結合ドメインを介したチロシナーゼとの相互作用が必須であることを見出した。また、RNF152によりチロシナーゼに付加されるユビキチン鎖タイプ（K48あるいはK63）について検討を行った結果、ユビキチン鎖タイプには特異性がないことが示唆された。さらに、チロシナーゼ同様メラニン合成に関わるメラノソーム膜タンパク質Tyrp-1もRNF152によりユビキチン化されることを見出した。しかしながら、そのユビキチン化効率はチロシナーゼに比べて低い。以上の結果から、RNF152は新規の色素遺伝子であることを提唱していく。（３）カイコ個体を用いたヒトチロシナーゼおよびヒトTyrp-1の大量発現系を確立できた。アフィニティカラムを用いることで、ある程度精製でき、ヒトチロシナーゼについては活性測定が可能となった。マイクロカロリーメーターを用いた化合物との相互作用測定にはもう少し精製純度を高める必要がある。

（1）从尾静脉施用B16黑色素瘤后，我们检查了三种类型的酪氨酸酶分解化合物是否可以抑制肺转移酶，但没有发现表现出显着差异的化合物。此外，将小鼠皮下移植B16黑色素瘤以形成肿瘤，并通过施用三种类型的酪氨酸酶分解诱导化合物来评估抗肿瘤效应，但目前可以发现一种显着差异的化合物。在初步实验中，通过直接接种肿瘤来证实肿瘤的形成，但未获得可重复性。（2）分析膜型泛素ligue rnf152的分子机制，该Ligue RNF152导致酪氨酸酶进行拆卸。通过使用3XFLAG-蛋白表达质粒，酪氨酸酶的酪氨酸酶通过检测敏感。结果，发现通过RNF152膜组合结构域与酪氨酸酶的相互作用对于酪蛋白酶犹太人至关重要。此外，检查泛素链类型（K48或K63）由RNF152添加到酪氨酸酶中，这表明泛素链类型没有特异性。此外，与酪氨酸酶一样，与黑色素合成有关的黑色素体膜蛋白Tyrp-1也被RNF152使用。但是，泛素效率低于酪氨酸酶。基于上述结果，RNF152提出了一个新的色素基因。（3）建立了人类Tyrp-1的大规模系统。通过使用亲和力柱，可以在一定程度上进行完善，并且可以进行人类手势酶的活性测量。使用微层表与化合物的相互作用的测量需要进一步增加纯化。

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるメラニン産生調節機構

膜结合泛素连接酶 RNF152 对黑色素产生的调节

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
藤田英明;上田亮太;藤井佑樹;高橋宏隆;竹田浩之;澤崎達也;本川智紀;徳永研三
通讯作者：
徳永研三

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるメラニン産生調節機構に関する研究

膜结合泛素连接酶RNF152调控黑色素生成机制的研究

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hasyim Ammar A.;Iyori Mitsuhiro;Mizuno Tetsushi;Abe Yu-ichi;Yamagoshi Iroha;Yusuf Yenni;Syafira Intan;Shahnaij Mohammad;Sakamoto Akihiko;Yamamoto Yutaro;Mizukami Hiroaki;Shida Hisatoshi;Yoshida Shigeto;上田亮太，大園誠也，藤井佑樹，高橋宏隆，竹田浩之，澤崎達也，本川智紀，徳永研三，藤田英明
通讯作者：
上田亮太，大園誠也，藤井佑樹，高橋宏隆，竹田浩之，澤崎達也，本川智紀，徳永研三，藤田英明

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるチロシナーゼのユビキチン化分子機構解明に関する研究

膜结合泛素连接酶RNF152阐明酪氨酸酶泛素化分子机制的研究

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
上田亮太;大園誠也;藤井佑樹;高橋宏隆;竹田浩之;澤崎達也;本川智紀;徳永研三;藤田英明
通讯作者：
藤田英明

膜結合型ユビキチンリガーゼRNF152によるチロシナーゼ分解の分子機構解明に関する研究

膜结合泛素连接酶RNF152降解酪氨酸酶分子机制研究

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
上田亮太;大園誠也;藤井佑樹;高橋宏隆;竹田浩之;澤崎達也;本川智紀;徳永研三;藤田英明;上田亮太，大園誠也，藤井佑樹，高橋宏隆，竹田浩之，澤崎達也，本川智紀，徳永研三，藤田英明
通讯作者：
上田亮太，大園誠也，藤井佑樹，高橋宏隆，竹田浩之，澤崎達也，本川智紀，徳永研三，藤田英明