ヒト乳癌細胞の増殖ならびに浸潤転移におけるエイコサノイドの役割

类二十烷酸在人乳腺癌细胞增殖和侵袭性转移中的作用

• 批准号: 09780568
• 负责人: 高橋 吉孝
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780568/
• 关键词: アラキドン酸; シクロオキシゲナーゼ; プロスタグランジン; ヒト乳癌細胞株; TPA; matrix metalloproteinase; overexpression

ヒト乳癌細胞におけるエイコサノイドの役割を調るために、その生合成に関わるシクロオキシゲナーゼ(COX)の機能について検討した。まずヒト乳癌細胞株Hs578を超音波破砕し、^<14>C標識のアラキドン酸とインキュベートしたところ、有意なアラキドン酸代謝活性は認められなかった。しかし、細胞を1μMのPhorbol(TPA)で刺激した後アラキドン酸代謝を調べると、50倍程度のシクロオキシゲナーゼ(COX)産物の産生増加が認められ、主な産生物はプロスタグランジン(PG)E2であった。また、Hs578Tで誘導されてくるCOX活性は、COX-2蛋白の発現増加にることが、ウェスタンブロットおよびノザンブロットで示された。Hs578TにおけるCOXの役割を調べるため、この細胞にヒトCOX-1とCOX-2のcDNAを組み込んだ発現ベクターをトランスフェクトし、安定形質発現株(Hs578TCOX1とHs578TCOX2)を得た。10μg/mlのコンカナバリンAの存在下で、Hs578TCOX1とHs578TCOX2のいずれも、matrix metalloproteinasc-2(MMP-2)の活性化が、Mock細胞に比べ促進されていることが、ゼラチンザイモグラフィーで示された。また、これらの細胞で膜型MMP(MT-MMP)の発現をノザンブロットで調べると、Mock細胞に比べて、Hs578TCOX1TPAで8倍、Hs578TCOX2で12倍の上昇が観察された。しかしながら、これらの細胞でのMMP-2の活性化の促進は、インドメサチンでは抑制されなかった。また、TPAあるいはPGE2をHs578T細胞に作用させても、MMP-2の活性化の促進は認められなかった。このようにCOX-1とCOX-2は、いずれもMT-MMPの発現上昇を介して、癌の浸潤転移に重要なMMP-2の活性化を促すが、その機構についてはさらに検討が必要であることが示された。以上の内容は、COXが乳癌の浸潤転移に重要な役割を果たすことを明らかにしたという点で大きな意義があり、現在投稿準備中である。

为了调整icosanoids在人类乳腺癌细胞中的作用，研究了与实时合成有关的环氧合酶（COX）的功能。首先，超声将粉碎人类乳腺癌细胞量HS578，并与^<14> C标志孵育时，没有明显的蛛网膜酸代谢。但是，如果细胞被1μm的佛波尔（TPA）刺激，然后检查了阿拉基多酸代谢，则大约50次环氧酶（COX）产物的产生，主要产物是前列腺素（PG）E2是。 Western Blott和Nozan Blott表明，HS578T诱导的COX活性增加了Cox-2蛋白的表达。为了检查Cox在HS578T中的作用，转染了该细胞中包含人Cox-1和Cox-2 cDNA的表达载体以获得稳定的结构表达（HS578TCOX1和HS578TCOX2）。在存在10μg/ml的kankanavalin A下，HS578TCOX1和HS578TCOX2都通过明胶zImogroghtion表明，与模拟细胞相比，矩阵金属蛋白蛋白酶的激活均可促进基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的激活。此外，当这些细胞检查了Nozan印迹的膜类型MMP（MT-MMP）的表达时，与模拟细胞相比，HS578TCOX1TPA的上升升高是HS578TCOX1TPA的8次，是HS578TCOX2的上升。但是，这些细胞中MMP-2的促进并未被印度抑制素抑制。另外，即使在TPA或PGE2作用于HS578T细胞上，也不允许促进MMP-2。这样，COX-1和COX-2都通过MT-MMP的升高来促进MMP-2的激活，这对于癌症浸润过渡很重要，但有必要进一步考虑该机制是。在阐明考克斯在乳腺癌浸润过渡中起着重要作用，并且目前正在准备上面的内容，上述内容显着显着。

项目成果

Takahiro Kinoshita: "Growth stimulation and induction of epidermal growth factor receptor by overexpression of cyclooxygenases 1 and 2 in human colon carcinoma cells" Biochimica et Biophysica Acta. (in press). (1999)

Takahiro Kinoshita：“通过在人结肠癌细胞中过表达环氧合酶 1 和 2 来刺激和诱导表皮生长因子受体”Biochimica et Biophysical Acta。