糖尿病性足壊疽に対する切り札-プロタミン含有創傷被覆材の開発-

对抗糖尿病足坏疽的王牌 - 含鱼精蛋白伤口敷料的开发 -

• 批准号: 21K09759
• 负责人: 梅山 広勝
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09759/
• 关键词: プロタミン; 創傷治癒; 創傷被覆材; 細胞毒性; エンドトキシン; 糖尿病性足壊疽; 抗菌作用; 創傷治癒促進

サケ白子由来タンパクであるプロタミンを用いた創傷被覆剤開発を進めている。昨年度の実験で、投与濃度の検証が行われ、それに引き続いてin vitroでの解析を行なった。マウスマクロファージであるRaw264.7を用いた刺激試験で、炎症性サイトカインの産生を認めたが、プロタミン高濃度での細胞毒性による細胞死が確認された。これは、プロタミンが陽電荷であることによる細胞の吸着が進むことによる生菌作用が細胞にも影響したためと考えられた。このため、特に至適濃度での濃度での投与が重要と考えられた。さらに、C3H／HeNおよびC3H／HeJマウスから採取した骨髄由来樹状細胞の刺激試験により、HeJマウスのサイトカイン産生がキャンセルされた。これは、TLR4を介した反応によるサイトカイン産生である可能性があり、プロタミン製剤のエンドトキシン含有の可能性が示唆された。そのため、エンドスペーシーキットでエンドトキシンの定量を行なったところ、エンドトキシン含有が判明した。今後、エンドトキシン吸着を行なった上でさらなる検証を進めていく予定である。プロタミンのエンドトキシン吸着は界面活性剤TritonX-114を用いて行う予定である。さらに、除去後の活性や創傷治癒効果をこれまでと同様の方法で行う。加えて、注射用製剤である硫酸プロタミンでも創傷治癒促進効果が認められるかを検証していく予定である。投与濃度に加えて、創傷治癒促進のメカニズムを明らかにし、創傷被覆材として使用する際に必要な事柄を探求していく。

我们正在开发一种使用鱼精蛋白（一种从鲑鱼鱼白中提取的蛋白质）的伤口敷料。去年的实验验证了剂量浓度，随后进行了体外分析。在使用小鼠巨噬细胞Raw264.7的刺激试验中，观察到炎性细胞因子的产生，但确认了由于高鱼精蛋白浓度的细胞毒性而导致的细胞死亡。这被认为是由于鱼精蛋白的正细胞吸附作用，这也影响了细胞。因此，以最佳浓度给药被认为特别重要。此外，对 C3H/HeN 和 C3H/HeJ 小鼠骨髓来源的树突状细胞的刺激研究取消了 HeJ 小鼠中细胞因子的产生。这可能是由于 TLR4 介导的反应产生细胞因子，表明鱼精蛋白制剂可能含有内毒素。因此，当使用endospace试剂盒对内毒素进行定量时，发现存在内毒素。未来我们计划吸附内毒素后进行进一步验证。鱼精蛋白的内毒素吸附将使用表面活性剂 TritonX-114 进行。此外，以与之前相同的方式评估去除后的活性和伤口愈合效果。此外，我们计划验证注射制剂硫酸鱼精蛋白是否也具有促进伤口愈合的作用。除了剂量浓度外，我们还将阐明促进伤口愈合的机制，并探讨将其用作伤口敷料的要求。