蛋白尿惹起分子p51のクローニング、並びにその分子機能の解明

蛋白尿诱导分子p51的克隆及其分子功能的阐明

基本信息

批准号：
09770842
负责人：
河内裕
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770842/
关键词：
糸球体上皮細胞スリットダイアフラグム蛋白尿 p51 ZO-1

项目摘要

糸球体上皮細胞足突起間のslit diaphragm(SD)の構成蛋白p51を認識する単クローン抗体5-1-6により誘導される蛋白尿の発症機序の検討を続けてきた。昨年度までの検討で、p51の正確な局在、並びにSD部の構成蛋白であると報告されているもう一つの蛋白であるZO-1の局在との異同を明らかにした。また蛋白尿出現時のp51とZO-1の動態を検討した結果、蛋白尿がピークとなる抗体静注5日目では、p51のみならずZO-1もSD部から消失していることを免疫組織化学的手法、Western blot 法を用いて証明した。これらの蛋白が消失しているにも関わらず通常の電子顕微鏡を用いた検討では、足突起の融合などの形態学的変化を見い出すことはできず、SD構造の分子レベルでの微小な変化が係蹄壁のバリアー機能の破綻を招いたと考えられた。本年度(平成10年度)は、これらp51,ZO-1の局在変化のメカニズムを解析するため、単離糸球体を用いたin vitroの系を確立し、各種阻害剤に対する感受性試験を行った。検討の結果、5-1-6抗体がその対応抗原であるp51と結合すると、Ca^<++>依存性のcalmodulin-cytoske1etonの系を介したtubuline非依存性、actin依存性の機序によりp51,ZO-1がSD部から遊離し、その結果引き起こされるSDの機能低下により病的蛋白尿がもたらされたと考えられた。これらの観察結果は、98年度第31回米国腎臓学会総会において報告した((J Am Soc Nephrol 9,499,1998 abstract)。また胎生12日目に取り出した後腎原基を9日間培養するとin vitroにおいてもp51が発現することを確認した。現在このp51合成期の腎器官培養材料から作製したcDNA libraryを用いてp51分子のクローニングを継続中である。

我们继续研究单克隆抗体5-1-6诱导的蛋白尿的发病机制，该抗体识别肾小球上皮细胞足突之间裂隙隔膜（SD）的组成蛋白p51。去年进行的研究揭示了 p51 的精确定位，以及它与 ZO-1 定位的差异，ZO-1 是另一种据报道是 SD 区域组成蛋白的蛋白质。此外，通过检查蛋白尿时p51和ZO-1的动态，我们发现在静脉注射抗体的第5天，蛋白尿达到峰值时，不仅p51而且ZO-1也从SD区域消失。使用组织化学方法和蛋白质印迹方法证明了这一点。尽管这些蛋白质消失了，但使用普通电子显微镜检查并没有发现任何形态变化，例如足突的融合，这表明SD结构在分子水平上发生了微小变化，人们认为这导致了失败。圈套壁的屏障功能。今年（1998年），为了分析p51和ZO-1定位变化的机制，我们利用分离的肾小球建立了体外系统，并对各种抑制剂进行了敏感性测试。研究结果表明，当5-1-6抗体与其相应的抗原p51结合时，它会通过Ca^++依赖的钙调蛋白-细胞骨架系统，被不依赖微管、肌动蛋白依赖的机制激活。人们认为p51和ZO-1从SD区域释放，由此导致的SD功能下降导致病理性蛋白尿。这些观察结果在1998年美国肾病学会第31届年会上报告((J Am Soc Nephrol 9,499,1998摘要)。此外，当在胚胎生命第12天取出的后肾原基培养9天时，体外我们还证实p51在p51分子中表达。我们目前正在使用在p51合成阶段从肾器官培养材料制备的cDNA文库继续克隆p51分子。