蛋白尿惹起分子p51のクローニング、並びにその分子機能の解明

蛋白尿诱导分子p51的克隆及其分子功能的阐明

基本信息

批准号：
09770842
负责人：
河内裕
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770842/
关键词：
糸球体上皮細胞スリットダイアフラグム蛋白尿 p51 ZO-1

项目摘要

糸球体上皮細胞足突起間のslit diaphragm(SD)の構成蛋白p51を認識する単クローン抗体5-1-6により誘導される蛋白尿の発症機序の検討を続けてきた。昨年度までの検討で、p51の正確な局在、並びにSD部の構成蛋白であると報告されているもう一つの蛋白であるZO-1の局在との異同を明らかにした。また蛋白尿出現時のp51とZO-1の動態を検討した結果、蛋白尿がピークとなる抗体静注5日目では、p51のみならずZO-1もSD部から消失していることを免疫組織化学的手法、Western blot 法を用いて証明した。これらの蛋白が消失しているにも関わらず通常の電子顕微鏡を用いた検討では、足突起の融合などの形態学的変化を見い出すことはできず、SD構造の分子レベルでの微小な変化が係蹄壁のバリアー機能の破綻を招いたと考えられた。本年度(平成10年度)は、これらp51,ZO-1の局在変化のメカニズムを解析するため、単離糸球体を用いたin vitroの系を確立し、各種阻害剤に対する感受性試験を行った。検討の結果、5-1-6抗体がその対応抗原であるp51と結合すると、Ca^<++>依存性のcalmodulin-cytoske1etonの系を介したtubuline非依存性、actin依存性の機序によりp51,ZO-1がSD部から遊離し、その結果引き起こされるSDの機能低下により病的蛋白尿がもたらされたと考えられた。これらの観察結果は、98年度第31回米国腎臓学会総会において報告した((J Am Soc Nephrol 9,499,1998 abstract)。また胎生12日目に取り出した後腎原基を9日間培養するとin vitroにおいてもp51が発現することを確認した。現在このp51合成期の腎器官培養材料から作製したcDNA libraryを用いてp51分子のクローニングを継続中である。

我们继续研究单克隆抗体5-1-6诱导的蛋白尿的机理，该抗体识别肾小球上皮细胞之间裂隙膜片（SD）的组成蛋白p51。在直到去年的研究中，我们揭示了p51的确切定位和ZO-1之间的差异，据报道，另一种蛋白质是SD区域的组成蛋白。此外，我们在蛋白尿时研究了p51和ZO-1的动力学，并证明，在静脉注射抗体输注的第五天，不仅p51，而且ZO-1也从SD区域消失了，使用了蛋白质印刷方法，一种免疫组织方法。尽管这些蛋白质消失了，但在正常电子显微镜研究中未发现诸如脚突起的形态变化，并且人们认为SD结构的分子水平的小变化导致蹄壁的屏障功能破裂。在今年（1998财年），为了分析p51和ZO-1中定位变化的机制，使用孤立的肾小球建立了体外系统，并对各种抑制剂进行了敏感性测试。通过研究的结果，人们认为，当5-1-6抗体与其相应的抗原p51结合时，通过CA^<++> - 依赖性的和肌动蛋白依赖的机制 - 依赖性的cal <++> - 依赖性的callosolytico-cytoseo-cytoske1eton系统释放了p51和ZO-1，从SD区域中释放出了p51和ZO-1，从而导致了病理蛋白质的proticality proticalia ria。这些观察结果在1998年美国肾脏病学会的第31股会议上报道（J Am Soc肾脏9,499,1998摘要）。还可以证实，当在胚胎生命的第12天培养9天的肾脏原发性时，p51表达也是体外的。目前，在p51合成阶段，使用肾脏器官培养物材料制备的cDNA文库继续使用p51分子的克隆。