アルツハイマー病脳のアミアロイドβ蛋白沈着阻害過程に関する分子生物学的研究

阿尔茨海默病脑内β淀粉样蛋白沉积抑制过程的分子生物学研究

基本信息

批准号：
09770750
负责人：
続佳代
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

これまで、アミロイドβ蛋白(Aβ)に結合するsequestrating蛋白のAβ凝集、沈着過程における役割を解明するために、ヒト剖検腎を対象に免疫病理学的、および生化学的検討を加えてきた。ヒト腎臓においてトランスサイレチン(TTR)がsequestrating蛋白として、Aβの凝集、沈着を阻害している可能性を示唆する結果が得られた。本年度は各Aβ分子種とTTRの関係を明らかにするために生化学的検討を加え、以下の結果が得られた。1) 免疫沈降:腎臓内でTTRとAβが結合して存在するかどうかを明らかにするために、免疫病理学的にAβ、TTRの存在が確認された凍結腎より遠心法にて粗抽出液を作成した。ヒト腎では分子量約15kDaのmonomerと分子量約35kDaのdimerのTTRが検出された。各抗体結合Sepharose 4Bにて免疫沈降を行うとBC42抗体で吸着・溶出された成分にはTTR-monomer、TTR-dimerのいずれもが検出されたが、BC40抗体ではいずれも微量しか免疫沈降されなかった。腎臓内のTTRにはAβ42が選択的に結合していることが明らかとなった。2) in vitro binding assay:免疫沈降において見られた所見を確認するために、さらにin vitroにおける各Aβ分子種とTTRの結合について検討を加えた。AβとTTRの反応産物を電気泳動すると、Aβ、TTR-monomer、およびTTR-dimerが染色された。Aβ42とTTRを反応させたときには、TTRにAβ42が結合した反応産物が検出されたが、Aβ40とTTRを反応させたときには、この結合物は認められなかった。3) in vitro overlay binding assay:膜上のAβ40、Aβ42にTTRを反応させると、TTRはAβ42に結合しやすかった。以上の結果よりTTRはin vivo、in vitroにおいて、より不溶型Aβ42に選択的に結合し、Aβ42はsequestrationされている可能性が示唆された。現在、培養腎細胞のcell lysateを用いて、各Aβ分子種に結合している蛋白の同定を試みている。

迄今为止，我们已经对人体尸检肾脏进行了免疫病理学和生化研究，以阐明与淀粉样β蛋白（Aβ）结合的隔离蛋白在Aβ聚集和沉积过程中的作用。我们的结果表明，运甲状腺素蛋白 (TTR) 作为一种隔离蛋白，可能会抑制 Aβ 在人肾脏中的聚集和沉积。今年，我们进行了生化研究，以阐明各个Aβ分子种类与TTR之间的关系，并获得了以下结果。 1)免疫沉淀：为了明确肾脏中是否存在TTR和Aβ，通过离心从冷冻肾脏中获得粗提物，其中通过免疫病理学证实了Aβ和TTR的存在。在人肾中，检测到分子量约为15kDa的单体和分子量约为35kDa的二聚体的TTR。当使用与各抗体结合的Sepharose 4B进行免疫沉淀时，在用BC42抗体吸附和洗脱的成分中检测到TTR单体和TTR二聚体，但仅微量的两者被BC40抗体免疫沉淀。研究表明，Aβ42 选择性地与肾脏中的 TTR 结合。 2）体外结合测定：为了证实免疫沉淀中观察到的结果，我们进一步研究了每种Aβ分子种类与TTR的体外结合。当Aβ和TTR的反应产物进行电泳时，Aβ、TTR单体和TTR二聚体被染色。当Aβ42和TTR反应时，检测到Aβ42与TTR结合的反应产物，但当Aβ40和TTR反应时，没有观察到该结合产物。 3)体外重叠结合实验：当TTR与膜上的Aβ40和Aβ42反应时，TTR很容易与Aβ42结合。上述结果表明，TTR在体内和体外均能更选择性地与不溶性Aβ42结合，且Aβ42可能被螯合。我们目前正尝试使用培养肾细胞的细胞裂解物来鉴定与每种 Aβ 分子种类结合的蛋白质。