肺小細胞癌におけるproGRP遺伝子の発現調節と遺伝子治療への応用に関する研究

小细胞肺癌proGRP基因表达调控及其在基因治疗中的应用研究

• 批准号: 09770427
• 负责人: 内田 和宏
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770427/
• 关键词: 肺小細胞癌; 腫瘍マーカー; 遺伝子発現; proGRP遺伝子; alternative splicing; GRP受容体遺伝子; autocrine growth factor; 遺伝子治療

Progastrin-releasing peptide(proGRP)はGRPの前駆体で,肺小細胞癌(SCLC)細胞で特異的に産生されるため,SCLCの腫瘍マーカーとして用いられている.近年,GRPのSCLCにおけるautocrine growth factorとしての作用が注目されているが,これはSCLC細胞から分泌されたGRPが癌細胞膜表面の主にGRP受容体(GRPR)に結合し,G蛋白を介するsignal伝達系を介して細胞増殖を促すことによるものである.1997および1998年度の今研究では,(1)SCLC患者の血清proGRP値と腫瘍内のproGRP mRNA発現との相関,(2)proGRP遺伝子発現SCLC腫瘍組織におけるmRNAのalternativesplicingの状況,(3)SCLC腫瘍組織におけるGRP蛋白産生,(4)SCLC腫瘍組織中のproGRP遺伝子およびGRPR遺伝子の発現の相関について検討した.まず,(1)SCLC7例から同意を得た上で腫瘍組織を採取し,mRNAを抽出後逆転写反応(RT)によりcDNAに変換し,proGRP mRNAに特異的なプライマーを用いてnested PCR増幅により解析した.その結果,血清proGRP値が高値を示した5例においてproGRP mRNAの発現が認められたが,上昇をみないSCLC患者2例の腫瘍内ではproGRP mRNAは検出されなかった.(2)次いで,proGRP遺伝子転写後alternative splicingによりtypeI,II,IIIの3種の成熟mRNAが生成されうるため,これら3群のmRNAの発現状況を比較検討した.その結果,腫瘍組織内でproGRP mRNAが発現している症例においてはmRNA分画の平均はtypeI 58%,typeII 0%,typeIII 42%であり,症例間で明らかな差異は認められなかった.(3)さらに,腫瘍組織内でのGRP蛋白産生の有無を抗ヒトGRP抗体を用いた免疫染色にて検討したところ,血清proGRP高値で腫瘍組織内のproGRP mRNA陽性の症例のみで,細胞内のGRP蛋白を確認しえた.(4)GRPR遺伝子mRNA発現については,7例のSCLC腫瘍をRT-nested PCR法にて検討の結果,proGRP mRNA発現の認められた5例中2例で陽性であった.以上よりGRPのSCLC細胞に対するautocrine growth factorとしての作用と,さらにGRPR遺伝子発現に対する制御作用の可能性が示唆された.今後.SCLC腫瘍組織内における他のGRP受容体であるNMB-RおよびBRS-3のmRNA発現の有無についても解析し,GRPがこれらの受容体を介してautocrine growth factorとして関与している可能性について検討するとともに,GRP産生SCLCと非産生SCLC患者との間に腫瘍増殖能や治療に対する反応性,予後などの臨床的差異があるかについても検討する予定である.

促进蛋白释放肽（Progrp）被用作SCLC肿瘤标记，因为它是由肺细胞癌（SCLC）专门产生的，该动作引起了人们的注意，但这是从SCLC细胞中分泌的GRP （grpr）在癌细胞膜的表面上，通过G蛋白促进细胞的生长。在肿瘤中的表达（2）progrp基因表达SCLC肿瘤组织状态，（3）我们检查了SCLC肿瘤组织中GRP蛋白的产生形式，（4）在SCLC肿瘤组织中的表达。通过反向受让人反应（RT）将mRNA转化为cDNA，并使用程序中的特定底漆通过嵌套的PCR扩增进行了分析。由于可以产生成熟的mRNA，因此有两个SCLC患者的肿瘤，因此比较了这三组的mRNA。在肿瘤组织中表达，型为42％，并且在肿瘤组织中的存在或不存在抗体抗体。仅在肿瘤组织中，在血清前期的肿瘤组织中，仅确认细胞中的GRP蛋白。提到的GRP SCLC细胞的自分泌生长因子以及对GRPR基因表达的影响的可能性，我们将分析NMB-R和BRS-3的mRNA表达组织和GRP将通过这些受体作为自分泌生长因子，我们将检查存在的可能性，还检查GRP生产SCLC和非生产的SCLC患者之间是否存在临床差异，例如为了肿瘤生长，对治疗的反应和预后。