内皮由来過分極因子の作用メカニズムの解明

阐明内皮源性超极化因子的作用机制

基本信息

批准号：
09770021
负责人：
石川智久
金额：
$ 1.22万
依托单位：
University of Shizuoka (1998)University of Tsukuba (1997)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

モルモット冠動脈においてアセチルコリン(ACh)により内皮細胞から遊離される内皮由来過分極因子(endothelium-derived hyperpolarizing factor:EDHF)に関する解析を行った。450〜600gの雄性モルモットから左冠動脈回旋枝を摘出し、実験に使用した。張力の測定は、内皮細胞が保存されたリング状標本を作製し、マグヌス法により行った。内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度の測定は、Fluo3を導入した血管条片を共焦点レーザー顕微鏡で観察することにより行った。また、コラゲナーゼ処理により得られた単一血管平滑筋細胞を用いて、パッチクランプ法により全細胞K^+電流を測定した。small-およびlarge-conductance Ca^<2+>-activatedK^+ channelsの阻害薬であるapaminおよびiberiotoxinは、EDHFによる弛緩反応に全く影響しなかった。一方、同じくlarge-conductance Ca^<2+>-activated K^+ channelsの阻害薬として知られているcharybdotoxinは、AChの濃度-反応曲線を右方にシフトさせ、さらに、apaminとcharybdotoxin共存下では、EDHFによる弛緩反応は完全に消失した。また、AChによる内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度の上昇にはapamin+charybdotoxinは影響しなかったことから、apamin+charybdotoxinが内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度上昇を抑制することによりEDHF遊離を抑制したのではないことが示唆された。一方、チトクロームP450の阻害薬として汎用されているproadifenは、EDHFによる弛緩反応を完全に抑制したが、単一細胞を用いた全細胞電流測定実験から、proadifenが血管平滑筋の電位依存性K^+チャネルを直接抑制することも明らかとなり、proadifenはDHFがチトクロームP450代謝産物であるepoxyeicosatrienoic acid(EET)であるか否かを判定する道具としては不適当であることがわかった。以上の結果から、EDHFの効果発現にはapamin+charybdotoxinより抑制されるK^+チャネルが関与しており、少なくともモルモット冠動脈におけるEDHFはEETではないことが示唆された。

我们分析了豚鼠冠状动脉中乙酰胆碱（ACH）从内皮细胞释放的内皮衍生的超极化因子（EDHF）。从450-600 g的雄性豚鼠中取出左冠状动脉圆周分支，并在实验中使用。通过制备包含内皮细胞的环形标本并通过Magnus方法进行测量来测量张力。通过使用共聚焦激光显微镜观察Fluo3引入的血管条来测量内皮细胞的细胞内Ca^<2+>。此外，通过使用胶原酶处理获得的单个血管平滑肌细胞进行贴片夹具测量总细胞K^+电流。 apamin和iberiotoxin是小传导和大传导症的抑制剂Ca^<2+> - ActivatedK^+通道，对EDHF引起的松弛反应没有影响。同时，Charybdotoxin（也称为大传导性Ca^<2+>激活的K^+通道的抑制剂）将ACH浓度响应曲线转移到右侧，并且在存在Apamin和Charybdotoxin的情况下，EDHF引起的弛豫反应完全消失了。此外，阿哌辛+charybdotoxin由于ACH引起的细胞内Ca^<2+>浓度的增加没有影响，这表明Apamin+Charybdotoxin不会通过抑制EDHF抑制EDHF抑制细胞内Ca^<2+浓度的增加，从而抑制EDHF释放。 On the other hand, proadifen, a widely used inhibitor of cytochrome P450, completely suppressed the relaxation response caused by EDHF, but from a whole-cell aerometry experiment using single cells, it was also revealed that proadifen directly inhibits voltage-dependent K^+ channels in vascular smooth muscle, and it was found that proadifen is inappropriate as a tool to determine whether DHF is an环氧树钠酸（EET），一种细胞色素P450的代谢产物。以上结果表明，Apamin+ Charybdotoxin抑制的K^+通道参与EDHF的发展，并且至少豚鼠冠状动脉中的EDHF不是EET。