内皮由来過分極因子の作用メカニズムの解明

阐明内皮源性超极化因子的作用机制

基本信息

批准号：
09770021
负责人：
石川智久
金额：
$ 1.22万
依托单位：
University of Shizuoka (1998)University of Tsukuba (1997)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

モルモット冠動脈においてアセチルコリン(ACh)により内皮細胞から遊離される内皮由来過分極因子(endothelium-derived hyperpolarizing factor:EDHF)に関する解析を行った。450〜600gの雄性モルモットから左冠動脈回旋枝を摘出し、実験に使用した。張力の測定は、内皮細胞が保存されたリング状標本を作製し、マグヌス法により行った。内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度の測定は、Fluo3を導入した血管条片を共焦点レーザー顕微鏡で観察することにより行った。また、コラゲナーゼ処理により得られた単一血管平滑筋細胞を用いて、パッチクランプ法により全細胞K^+電流を測定した。small-およびlarge-conductance Ca^<2+>-activatedK^+ channelsの阻害薬であるapaminおよびiberiotoxinは、EDHFによる弛緩反応に全く影響しなかった。一方、同じくlarge-conductance Ca^<2+>-activated K^+ channelsの阻害薬として知られているcharybdotoxinは、AChの濃度-反応曲線を右方にシフトさせ、さらに、apaminとcharybdotoxin共存下では、EDHFによる弛緩反応は完全に消失した。また、AChによる内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度の上昇にはapamin+charybdotoxinは影響しなかったことから、apamin+charybdotoxinが内皮細胞の細胞内Ca^<2+>濃度上昇を抑制することによりEDHF遊離を抑制したのではないことが示唆された。一方、チトクロームP450の阻害薬として汎用されているproadifenは、EDHFによる弛緩反応を完全に抑制したが、単一細胞を用いた全細胞電流測定実験から、proadifenが血管平滑筋の電位依存性K^+チャネルを直接抑制することも明らかとなり、proadifenはDHFがチトクロームP450代謝産物であるepoxyeicosatrienoic acid(EET)であるか否かを判定する道具としては不適当であることがわかった。以上の結果から、EDHFの効果発現にはapamin+charybdotoxinより抑制されるK^+チャネルが関与しており、少なくともモルモット冠動脈におけるEDHFはEETではないことが示唆された。

我们分析了内皮源性超极化因子（EDHF），它是由豚鼠冠状动脉中的乙酰胆碱（ACh）从内皮细胞释放的。从体重450至600g的雄性豚鼠中取出左回旋冠状动脉并用于实验。通过制备保存有内皮细胞的环形样品并使用马格努斯法来测量张力。通过使用共焦激光显微镜观察Fluo3转染的血管条来测量内皮细胞中的细胞内Ca 2+ 浓度。另外，使用通过胶原酶处理获得的单个血管平滑肌细胞通过膜片钳法测量全细胞K^+电流。 Apamin 和伊贝毒素（小电导和大电导 Ca ^ 2+ 激活的 K ^+ 通道的抑制剂）对 EDHF 诱导的松弛反应没有影响。另一方面，charybdotoxin也被称为大电导Ca^2+激活的K^+通道的抑制剂，使ACh浓度-反应曲线向右移动，此外，在与apamin共存时和charybdotoxin，EDHF引起的松弛反应完全消失。另外，apamin+charybdotoxin对ACh引起的内皮细胞内Ca 2+ 浓度的增加没有影响，因此apamin+charybdotoxin抑制了内皮细胞内Ca 2+ 浓度的增加。表明 EDHF 释放并未因此受到抑制。另一方面，广泛用作细胞色素P450抑制剂的Proadifen完全抑制EDHF诱导的松弛反应，还显示Proadifen直接抑制DHF（一种细胞色素P450代谢物）和环氧二十碳三烯酸。人们发现它不适合作为确定它是否是酸（EET）的工具。这些结果表明，被 apamin+charybdotoxin 抑制的 K^+ 通道参与 EDHF 效应的表达，并且 EDHF，至少在豚鼠冠状动脉中，不是 EET。