血管平滑筋弛緩反応におけるイオンチャンネルの関与

离子通道参与血管平滑肌松弛反应

基本信息

批准号：
08770026
负责人：
石川智久
金额：
$ 0.64万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウサギ冠動脈平滑筋の単離細胞を常法により作成し、パッチクランプ法によりKチャンネルの性質を調べた。本研究では、細胞外溶液のNaイオンをKイオンに置き換え、細胞内外のKイオン濃度を同一にすることによりKイオンの平衡電池を0mVとし、-60〜-50mV付近のドライビング・フォースを大きくすることで、生理的な膜電位の範囲でKイオン電流を内向き電流として記録することを試みた。その結果、通常の細胞外液においては外向きKイオン電流は-30付近からしか検出されないのに対して、高濃度Kイオン溶液中では-50mVから内向きKイオン電流が観察できることを見いだした。内向き電流として記録されたこのKイオン電流は、各種Kチャンネルの特異的阻害薬を用いた薬理学的解析により、主に遅延整流K電流であることが判明した。次にこの方法を用いて、冠動脈平滑筋細胞のKチャンネルに対するcAMPおよびcGMPの作用を調べた。細胞内cAMPレベルを上昇させる、β-アドレナリン受容体刺激薬であるイソプロテレノール、およびアデニル酸シクラーゼ活性薬であるフォルスコリンは、いずれもlarge-conductance Ca activated K Channel(BKチャンネル)を活性化することが示された。しかしその効果は膜電位が+側である場合のみ観察され、生理的に意味のある効果であるかどうかは現在のところ不明である。一方、細胞内cGMPレベルを上昇させる、NOドナーであるニトロプルシッドやSIN-1は、同様にBKチャンネルの活性化をもたらしたが、これに加えて、生理的な膜電位の範囲で少なくとももう一種類別のKチャンネルを活性化することが示された。このKチャンネルがどんな性質のチャンネルであるかを現在検討中である。

采用常规方法制备离体兔冠状动脉平滑肌细胞，采用膜片钳法研究K通道特性。本研究通过用K离子替代细胞外溶液中的Na离子，并使电池内外K离子浓度相同，将K离子平衡电池设置为0 mV，驱动力在-60至-50左右mV 增加，因此，我们尝试将 K 离子电流记录为生理膜电位范围内的内向电流。结果，我们发现在正常细胞外液中，仅在-30 mV左右检测到向外的K离子电流，而在高浓度K离子溶液中，从-50 mV开始可以观察到向内的K离子电流。该K离子电流被记录为内向电流，通过使用各种K通道的特定抑制剂的药理学分析发现该K离子电流主要是延迟整流K电流。接下来，我们利用该方法研究了cAMP和cGMP对冠状动脉平滑肌细胞K通道的影响。 β-肾上腺素受体兴奋剂异丙肾上腺素和腺苷酸环化酶激活剂毛喉素均可激活大电导 Ca 激活 K 通道（BK 通道），从而增加细胞内 cAMP 水平。然而，这种效应仅在膜电位处于+侧时才能观察到，目前尚不清楚这是否是具有生理意义的效应。另一方面，增加细胞内cGMP水平的NO供体硝普钠和SIN-1同样导致BK通道激活，但除此之外，至少在生理膜电位范围内已显示激活一种类型。 K 通道。我们目前正在考虑这个 K 通道的性质。