Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIV欠損マウス作製と機能解析

Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IV缺陷型小鼠的产生和功能分析

基本信息

批准号：
09770002
负责人：
阪上洋行
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

Ca^<2+>シグナル伝達機構に深く関与するCa^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼ(CaMキナーゼ)の神経細胞における生理的意義を解明すべく、平成10年度科学研究費申請計画に従い以下のような成果をあげた。(1) 遺伝子欠損マウスの作成:129SVマウスのCaMキナーゼIVゲノムDNAを単離、構造解析を行い、ターゲッティングベクターを作製した。東京大学医科学研究所勝木教授との共同研究により相同組み換え体を含むES細胞の同定し、キメラマウスを作製に成功し、現在、機能解析のため、F1マウスの作成のため交配中である。(2) CaMキナーゼIVの活性化機構の解析:近年、本酵素の活性化には上流活性化酵素に存在するCaMキナーゼキナーゼ(CaMKK)によるリン酸化が必須であることが明らかになってきた。申請者は本酵素の活性化機構を解明する一助としてCaMKKの2つの分子の遺伝子発現局在をin situハイブリダイゼーション法を用いて検討した。その結果、2つの分子種が神経系において異なる発現様式を示すことを明らかにし報告した(Mol.Brain Res.1998)。さらに2つの分子の機能の場を明らかにするため抗体を作成し、現在、免疫組織学的に2つの分子の細胞内局在を解析中である。以上、申請した実験計画に従い、CaMキナーゼの分子多様性の神経細胞における生理的意義の解明のために着実に研究を展開している。

为了阐明深入参与Ca^2+信号转导机制的Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶（CaM激酶）在神经细胞中的生理意义，按照1998年科研补助金申请计划取得了以下成果。 (1)基因缺陷小鼠的创建：分离129SV小鼠的CaM激酶IV基因组DNA，进行结构分析，并创建靶向载体。通过与东京大学医学科学研究所Katsuki教授的联合研究，我们成功鉴定出含有同源重组体的ES细胞并培育出嵌合小鼠，目前正在培育F1小鼠进行功能分析。 (2)CaM激酶IV的激活机制分析：近年来，已经明确上游激活酶CaM激酶激酶(CaMKK)的磷酸化对该酶的激活至关重要。为了帮助阐明该酶的激活机制，申请人利用原位杂交研究了两个CaMKK分子的基因表达定位。结果，我们澄清并报告了这两种分子在神经系统中表现出不同的表达模式（Mol.Brain Res.1998）。此外，我们创建了抗体来阐明这两个分子的功能位点，目前正在使用免疫组织化学分析这两个分子的细胞内定位。根据提出的实验计划，我们正在稳步开展研究，以阐明神经元中CaM激酶分子多样性的生理意义。