ブタ始原生殖細胞の体外培養およびブタEG細胞株の作出

猪原始生殖细胞的体外培养及猪EG细胞系的产生

• 批准号: 09760252
• 负责人: 高木 優二
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760252/
• 关键词: ブタ; 始原生殖細胞; PGC; EG細胞; ES細胞

マウス胚性幹(ES)細胞や始原生殖(PGC)細胞由来のEG細胞のように多能性を維持し、さらに次世代の子孫が得られる細胞株は、ブタをはじめ家畜では得られていない。そこで本研究では、妊娠22〜33日齢のブタ胎仔よりPGC細胞を採取し、EG細胞株を樹立するために体外培養を試みた。本研究の結果から以下の知見が得られた。1)胎仔の生殖隆起をコラーゲナーゼ・ディスパーゼ液で解離後、抗体磁気ビーズを用いて選択的にPGC細胞を単離・精製する手法につい検討した。その結果、高い回収率、高い純度でPGC細胞が得られることが明らかとなった。しかしながら、得られたPGC細胞の生存率は低く、胎仔採取から細胞の分離までの処理方法についてさらに検討する必要があることが示唆された。2)膜結合型SCF(幹細胞成長因子)を発現するフィーダー細胞(S14-m220細胞)を用いて、PGC細胞の培養を試みた。その結果、S14-m220細胞をフィーダー細胞に用いることによりPGC細胞数がSTO細胞に比べ多くなることが明らかとなった。3)PGC細胞の培養における成長因子の影響について検討した。その結果、PGC細胞をLIF(白血病成長因子)、SCF、bFGF(塩基性線維芽細胞成長因子)の成長因子を添加した培養液中で培養した場合、PGC細胞の増殖は促進されなかった。しかし、これらの因子の他にFK(フォリスコリン)を添加した培養液中で培養した場合、ALP活性の高い細胞が著しく多く増殖することが明らかとなった。Buffalo Rat Liver(BRL)細胞の培養上清液およびアセチルシステインについても検討したが、これらには著しい促進効果は認めれれなかった。以上の培養条件下で継代培養を試みたが、アルカリフォスファターゼ(ALP)活性およびSSEA-1抗体陽性のES細胞様の細胞株は得られなかった。

维持多能的细胞系，例如源自原始后代（PGC）细胞的小鼠胚胎（ES）细胞和EG细胞，并且可以在猪或其他牲畜中获得下一代后代。因此，在这项研究中，从22-33天大的猪胎儿中收集PGC细胞，并尝试在体外培养中建立EG细胞系。这项研究的结果提供了以下发现：1）我们研究了一种使用抗体磁珠选择性地分离和纯化PGC细胞的方法，该方法将胎儿生殖脊与胶原酶和分散酶溶液分离后。结果，可以发现可以以高回收率和高纯度获得PGC细胞。但是，获得的PGC细胞的存活率很低，这表明需要进一步研究胎儿收集到细胞分离的治疗方法。 2）尝试使用表达膜结合的SCF（干细胞生长因子）的馈线细胞（S14-M220细胞）培养PGC细胞。结果，发现使用S14-M220细胞作为进料细胞会导致PGC细胞数量高于STO细胞。 3）研究了生长因子对PGC细胞培养的影响。结果，当将PGC细胞培养在培养培养基中，这些培养基添加了生长因子（白血病生长因子），SCF和BFGF（基本成纤维细胞生长因子）时，PGC细胞的增殖并未促进。但是，据揭示，当在含有FK（Foliskolin）的培养基中培养时，ALP活性高的细胞显着增殖。还研究了水牛大鼠肝脏（BRL）细胞和乙酰半胱氨酸的培养上清液，但未观察到明显的启动子效应。在上述培养条件下尝试了亚培养，但是没有获得SSEA-1抗体阳性的碱性磷酸酶（ALP）活性或ES细胞系。