アトピー性皮膚炎患者単球の高親和性IgEレセプター依存性サイトカイン産生の検討

特应性皮炎患者单核细胞中高亲和力 IgE 受体依赖性细胞因子产生的检查

• 批准号: 08770665
• 负责人: 竹中 基
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770665/
• 关键词: アトピー性皮膚炎; 高親和性IgEレセプター; 低親和性IgEレセプター; 単球; Tumor necrosis factor-α; アトピー性皮膚炎; 高親和性IgEレセプター; 低親和性IgEレセプター; 単球; Tumor necrosis factor-α

当初の計画に基づき、informed conscentを得た、アトピー性皮膚炎(AD)患者および健常人から、ヘパリン加採血を行い、比重遠心法により末梢血単核球を分離、酸処理により単核球表面のIgEを取り除き、96穴培養プレートに分注し、付着細胞を単球とした。以下の種々の刺激を加え培養し、その上清中のTumor necrosis factor-α(TNF-α)をTNF-α ELISA kit(R&D社)にて測定した。AD単球を抗高親和性IgEレセプターモノクローナル抗体(aFc ε RI mAb)、抗低親和性IgEレセプターモノクローナル抗体(aFc ε RII mAb)で刺激したところ、未刺激の場合(100%)に比べ、aFc ε RI mAbでは、“有意なTNF-αの遊離(238.0%【.+-。】124.4)が認められたが、aFc ε RII mAbでは、有意差は認められなかった。さらに、reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)法により、aFc ε RI mAbによるTNF-αのmRNAの発現も確認した。また、IgE免疫複合体(IgE-aIgE)、1ipopolysaccharide(LPS)の刺激でもそれぞれ、390.7%【.+-。】226.2、350.9%【.+-。】167.7と有意なTNF-αの遊離を認めた。しかし、IgEのみや抗IgEモノクローナル抗体のみの刺激では、いずれも有意なTNF-αの遊離は認めなかった。また、aFc ε RI mAbやIgE-aIgE刺激によるTNF-αの遊離は、血清中IgE-RIST値とは相関しなかった。一方、健常人から採取した単球では、LPSの刺激で有意なTNF-αの遊離を認めた(146.2%【.+-。】15.8)が、その程度はADに比べ有意に低かった。aFc ε RI mAb、aFc ε RII mAb、IgE-aIgE刺激では、未刺激時と同程度のTNF-α遊離しか観察されなかった。以上の結果より末梢血単球においてFc ε RIおよびIgE依存性にTNF-αが遊離されることが明らかになった。現在までにわれわれはFc ε RI架橋により、prostaglandin E2が遊離される事を報告しているが、、Fc ε RI依存性に単球よりTNF-αなどアレルギーに関与するサイトカインが産生され、ADなどの病態を就職されている可能性が示唆された。

根据最初的计划，从特应性皮炎（AD）的患者中收集了肝素化的血液，并通过特定的重力离心分离获得知情的浓度，周围血液单核细胞分离，酸治疗在单核细胞的表面上除去IgE，并分配到96韦尔培养培养基中，以形成96-Well培养板形成型均型均型群体，以形成单型细胞。通过应用以下各种刺激进行培养，并使用TNF-αELISA试剂盒（R＆D）测量上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。当用抗高亲和力IgE受体单克隆抗体（AFCεRIMAB）和抗低亲和力IgE受体单克隆抗体（AFCεRIMAB）刺激多个单核细胞时，AFCεRIMAB显着释放了TNF-α（238.0％）[238.0％] [;++ - +]。 AFCεRImAb未观察到显着差异。此外，使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法获得AFCεRI。我们还通过mAb证实了TNF-αmRNA的表达。此外，刺激IgE免疫复合物（IgE-GIAN）和1ipopolysacachide（LPS）在390.7％[。+ - 。] 226.2和350.9％[。+ - 。] 167.7分别显着释放TNF-α。但是，在任何一种情况下，仅刺激IgE或抗IgE单克隆抗体均未显示TNF-α的显着释放。此外，通过mAb或Ige-Ige刺激将TNF-α释放的AFCεRI与血清IgE r-Rist值无关。另一方面，在从健康个体中收集的单核细胞中，当刺激LPS时观察到TNF-α的显着释放（146.2％[。+ - 。] 15.8），但该程度明显低于AD。使用AFCεRImAb，AFCεRIImAb和IgE-GIA-IGE刺激，仅观察到TNF-α的释放水平与未观察到未刺激时相同的释放水平。从上述结果中可以揭示出TNF-α在FCεRI和IgE的外周血单核细胞中释放。迄今为止，我们已经报道说，前列腺素E2是由FCεRI交联释放的，但是FCεRI已提出依赖RI依赖性的细胞因子（例如TNF-α）是由单核细胞产生的，这表明它们可能在病理条件下用于AD等病理条件。