大腸癌患者における抗EGFR抗体薬効果予測を目的とした腫瘍内LDHB発現量の解析

结直肠癌患者瘤内LDHB表达水平预测抗EGFR抗体药效分析

基本信息

批准号：
18H00405
负责人：
長嶺歩
金额：
$ 0.34万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00405/
关键词：
乳酸脱水素酵素B 大腸がん抗EGFR抗体薬

项目摘要

KRAS遺伝子野生型大腸癌患者における抗EGFR抗体薬抵抗性の原因として、遺伝子解析の他にもタンパク質の質的・量的変化が重要と考えられる。申請者はこれまでにヒト大腸癌細胞株を用いたバイオマーカー探索研究において、細胞質内の乳酸脱水素酵素(LDH) Bの高発現が抗EGFR抗体薬の1つであるセツキシマブの先天的および後天的耐性化に関与している可能性を見出した。しかし、その臨床的意義は未だ不明である。本申請課題では、大腸癌患者由来の腫瘍組織を用いて、抗EGFR抗体薬の効果予測マーカーとしてのLDHBの臨床的有用性を後方視的に評価する。まず、腫瘍組織からのタンパク質抽出およびLDHB解析の条件検討を実施した。市販のタンパク質抽出キットを用いることで、腫瘍検体約10mgから解析に必要なタンパク質を十分量抽出することができた。抽出したタンパク質を還元アルキル化後、トリプシンにより断片化した。得られたサンプルを脱塩・濃縮カラムを用いて精製・濃縮し、LDHBに特異的なアミノ酸配列(SADTLWDIQK)をLC-MS/MSを用いて分析し、LDHB発現量を解析した。複数の腫瘍組織を解析した結果、細胞内LDHB発現量は腫瘍により大きく異なることを確認した。現在は、大腸癌患者の腫瘍組織解析のための準備を進めている。今後、セツキシマブの奏効率、無増悪生存期間および全生存期間と腫瘍組織中LDHB発現量との相関性を検討することで、LDHB測定の臨床的有用性を評価する予定である。

除遗传分析外，蛋白质的定性和定量变化被认为是KRAS基因野生瘤患者的抗-EGFR抗体耐药性的原因。申请人在生物标志物搜索研究中使用人类大肠癌细胞，当时乳酸-DE-氢氢酶（LDH）在细胞质中，抗-egfr抗体药物之一的先天性和抗体抗体抗体药物之一是抗-egfr抗体药物之一。发现有可能参与目标公差。但是，其临床意义仍然未知。在此应用中，使用源自结直肠癌患者的肿瘤组织，对LDHB作为预测标记的抗-EGFR抗体药物的临床实用性进行了预期。首先，从肿瘤组织进行了蛋白质提取和LDHB分析条件。通过使用市售的蛋白质提取试剂盒，可以从约10 mg肿瘤样品中提取分析所需的蛋白质。返回烷基后，提取的蛋白被胰蛋白酶碎片。使用抗盐和浓缩柱纯化所获得的样品并浓缩，分析使用LC-MS/MS的特异性氨基酸序列（SADTLWDIQK）进行LDHB，并分析LDHB表达。由于分析了多个肿瘤组织，因此证实细胞内LDHB表达的量取决于肿瘤。目前，我们正在为结直肠癌患者准备肿瘤组织分析。将来，将通过检查setsukishimab的性能效率，无期生存期以及肿瘤组织中LDHB表达量之间的相关性来评估LDHB测量的临床实用性。