KRAS野生型大腸癌患者に対する抗EGFR抗体薬効果予測マーカータンパク質の探索

寻找预测抗EGFR抗体药物对KRAS野生型结直肠癌患者效果的标志蛋白

基本信息

批准号：
15H00498
负责人：
長嶺歩
金额：
$ 0.38万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H00498/
关键词：
プロテオミクスセツキシマブ大腸癌

项目摘要

KRAS遺伝子野生型大腸癌患者における抗EGFR抗体薬抵抗性の原因として、遺伝子解析の他にもタンパク質の質的・量的変化が重要と考えられる。本申請課題では、質量分析計を用いて腫瘍組織中のタンパク質を網羅的に解析し、抗EGFR抗体薬による治療効果との関連性を評価することで、KRAS遺伝子野生型の大腸癌患者に対する抗EGFR抗体薬の効果予測に有用なマーカータンパク質を検出することを目的とした。まず、KRAS等の抗EGFR抗体薬の効果に関連する遺伝子が野生型であり、抗EGFR抗体薬の1つであるセツキシマブの感受性が異なる6種類の大腸癌細胞株(感受性株 : C99、SW48 部分耐性株 : HT55、C10 耐性株 : COLO320DM、CACO2)より抽出した全タンパク質を細胞質および細胞膜タンパク質に分画化し、還元アルキル化後、トリプシンにより断片化した。得られたサンプルを脱塩・濃縮カラムおよび界面活性剤除去カラムにより精製・濃縮し、LC-TOF MSを用いて解析した。得られた全成分ピークを主成分解析および判別分析を行うことで、セツキシマブの感受性と相関する成分ピークを56種類抽出することができ、そのうち、ピーク強度とセツキシマブ感受性が有意に相関する3つの成分ピークを検出することができた。現在は、より高感度にセツキシマブ感受性を予測できる成分ピークを検出するために、カチオン交換カラムを用いた分画化等を含めた前処理方法の検討を行っている。また、LC-TOF MSにて検出された成分ピークのアミノ酸配列を同定するため、LC-MS/MSを用いた解析を行っている。今後、患者検体の測定を行い、細胞株より検出したセツキシマブ感受性予測ピークの臨床的有用性の評価を行う予定である。

除遗传分析外，蛋白质的质和量的变化被认为是KRAS野生型结直肠癌患者抗EGFR抗体耐药的重要原因。在这个项目中，我们将利用质谱仪全面分析肿瘤组织中的蛋白质，并评估其与抗EGFR抗体药物治疗效果的关系，目的是检测有助于预测EGFR抗体药物疗效的标记蛋白。首先，与KRAS等抗EGFR抗体药物作用相关的基因为野生型，六种结直肠癌细胞系（易感株：C99、SW48）对抗EGFR抗体药物西妥昔单抗的敏感性不同。耐药菌株：HT55、C10 耐药菌株：从COLO320DM（CACO2）中提取的总蛋白被分级为细胞质和细胞膜蛋白，还原烷基化，然后用胰蛋白酶片段化。使用脱盐/浓缩柱和表面活性剂去除柱对获得的样品进行纯化和浓缩，并使用LC-TOF MS进行分析。通过对所有获得的成分峰进行主成分分析和判别分析，我们能够提取出与西妥昔单抗敏感性相关的56种成分峰，其中可以检测到3个峰强度与西妥昔单抗敏感性显着相关的成分峰。。我们目前正在研究预处理方法，包括使用阳离子交换柱进行分级，以检测可以更灵敏地预测西妥昔单抗敏感性的组分峰。此外，我们正在使用LC-MS/MS进行分析，以鉴定LC-TOF MS检测到的成分峰的氨基酸序列。未来，我们计划测量患者样本并评估从细胞系检测到的西妥昔单抗敏感性预测峰的临床效用。