GGCX活性評価とプロテオーム解析を用いた新規ワルファリン効果規定因子の探索

使用 GGCX 活性评估和蛋白质组分析寻找新的华法林效应决定因素

基本信息

批准号：
22K15324
负责人：
長嶺歩
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Takasaki University of Health and Welfare
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15324/
关键词：
ワルファリン GGCX ビタミンK 凝固活性プロテオミクス

项目摘要

ワルファリン（WF）の薬効予測のために多くの研究が実施されてきたが、効果規定因子の約40%は不明のままである。過去の研究ではPT-INRを用いて効果規定因子を探索しているため、未解明の個人差の要因がビタミンK（VK）サイクルから血液凝固のどの過程にあるのかが不明である。WFはγ-グルタミルカルボキシラーゼ（GGCX）の活性低下を介して薬効を示すため、本研究ではVKサイクル内の各因子によりGGCX活性を規定できるか、およびGGCX活性により凝固活性を規定できるかを分けて評価することで未解明の効果規定因子がどの過程にあるかを明らかにする。さらに個人差の過程に関連するタンパク質のプロテオミクスにより新規WF効果規定因子の検出を試みる。当該年度では「VKサイクル内の各因子によりGGCX活性を規定できるか」についての以下を実施した。1）VKサイクル内の因子とGGCX活性との相関の検討既知WF効果規定因子であるCYP2C9、CYP2C19、CYP4F2、VKORC1、GGCXの遺伝子変異をTaqman-Probe法を用いて解析した。また、ビタミンK（phylloquinone、menaquinone-4）およびWFの前処理方法の検討を実施し、高速液体クロマトグラフ―質量分析（LC-MS）法およびLC-UV法による測定系を確立した。さらに、GGCX活性を評価するため、VK依存性タンパク質（VKDP）の血液凝固因子のうち、半減期が長く血中濃度の高いプロトロンビンの特異的なペプチド配列6種を合成し、LC-MS法による測定系を確立した。2）GGCX活性とVK依存性タンパク質（VKDP）の凝固因子活性の相関の検討VKDPの血液凝固因子（第Ⅱ、第Ⅶ、第Ⅸ及び第Ⅹ因子）の凝固活性をシスメックス社の全自動血液凝固測定装置CA-600を用いて測定した。

已经进行了许多研究来预测葡萄林（WF）的药物影响，但约40％的效果规定因素仍然未知。在过去的研究中，尚不清楚维生素K（VK）周期中哪种血液凝结过程，因为PT-INR正在探索效果供应因子。为了通过γ-谷甲基钙化酶（GGCX）的活性来显示药物效应，可以通过VK循环中的每个因素来定义GGCX活性，并且是否可以通过评估，评估，GGCX活性来定义凝血活性。我们将在解散效果的过程中阐明。此外，试图检测与个体差异相关的蛋白质蛋白质组学来检测新的WF效应。在相关年份中，对“是否可以通过VK周期中的每个因素来定义GGCX活性”进行以下操作。 1）检查VK循环和GGCX活性中的因子GGCX活性之间的相关性是WF效应CYP2C9，CYP2C19，CYP4F2，VKORC1，GGCX遗传突变，使用Taqman-Probe方法。此外，通过高速液态色谱质量分析（LC-MS）和LC-UV方法进行了测量系统，并进行了LC-UV测量系统，以检查维生素K（phylloquinone，phylloquinone， Menaquinone-4）和WF。此外，为了评估GGCX活性，通过LC-MS方法合成了六个具有长血和高血浓度的蛋白bin的特定肽序列（VKDP）。 2）检查GGCX活性和VK依赖性蛋白质（VKDP）VKDP的血液凝结因子（II，ⅸ和ⅹ因子）的凝结因子活性是使用测量测量的SYSMEX的完整自动血液凝结的凝结活性。设备CA-600。